| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 1.文献综述 | 第11-36页 |
| ·细菌S-层及其一般性质 | 第12-15页 |
| ·细菌S-层的多样性 | 第15-21页 |
| ·S-层结构的多样性 | 第15-18页 |
| ·S-层在不同细菌种属中存在的多样性 | 第15页 |
| ·不同的S-层致使表达形成不同的菌落形态 | 第15页 |
| ·S-层结构装配的多样性 | 第15-17页 |
| ·组成S-层晶格的结构多样性 | 第17页 |
| ·S-层结构装配的牢固性存在多样性 | 第17-18页 |
| ·S-层蛋白的多样性 | 第18-20页 |
| ·S-层蛋白的大小呈现多样性 | 第18页 |
| ·组成S-层的基本蛋白单元的多样性 | 第18页 |
| ·形成S-层晶体的蛋白质结构单元同源性的多样性 | 第18页 |
| ·S-层蛋白结构域的多样性 | 第18-19页 |
| ·S-层蛋白转译后修饰的多样性 | 第19页 |
| ·S-层蛋白作为抗原的多态性 | 第19-20页 |
| ·S-层蛋白基因的多样性 | 第20-21页 |
| ·编码S-层蛋白的基因多样性 | 第20页 |
| ·S-层基因的结构多样性 | 第20页 |
| ·S-层基因的启动子结构的多样性 | 第20-21页 |
| ·细菌S-层的功能多样性 | 第21页 |
| ·细菌S-层的应用 | 第21-28页 |
| ·细菌S-层的应用概述 | 第21-23页 |
| ·细菌S-层的应用基础 | 第23-26页 |
| ·S-层蛋白的自装配 | 第23页 |
| ·S-层蛋白与次细胞壁多聚体(SCWP)的相互作用 | 第23-26页 |
| ·细菌S-层的应用实例 | 第26-28页 |
| ·S-层融合蛋白和其应用 | 第26-28页 |
| ·S-层蛋白在微米和纳米材料上的应用 | 第28页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群的S-层 | 第28-32页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群简介 | 第28-31页 |
| ·蜡状芽胞杆菌群的S-层 | 第31-32页 |
| ·细菌S-层研究方法综述 | 第32-34页 |
| ·细菌S-层观测研究方法 | 第32-33页 |
| ·细菌S-层基因在外源宿主中的表达 | 第33页 |
| ·细菌S-层蛋白结构与功能的研究 | 第33-34页 |
| ·本文的研究背景及研究意义 | 第34-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌CTC菌株产生的伴胞晶体及其产生的条件 | 第34页 |
| ·苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体 | 第34页 |
| ·苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面的S-层结构 | 第34-35页 |
| ·苏云金芽胞杆菌中S-层基因的普查 | 第35页 |
| ·苏云金芽胞杆菌CTC菌株的分类鉴定 | 第35页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第35-36页 |
| 2.材料与方法 | 第36-54页 |
| ·菌株 | 第36-37页 |
| ·质粒 | 第37页 |
| ·引物 | 第37-38页 |
| ·培养基和实验试剂 | 第38-40页 |
| ·培养基和普通实验试剂 | 第38-39页 |
| ·生化试剂及免疫试剂 | 第39-40页 |
| ·生物测定供试昆虫和靶细胞 | 第40页 |
| ·DNA测序公司 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·各种溶液及配方 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·微生物培养条件及菌种保藏 | 第41页 |
| ·碱裂解法抽提大肠杆菌质粒DNA | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第41-42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA抽提 | 第42页 |
| ·DNA片段的回收 | 第42-43页 |
| ·DNA的纯化 | 第43页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第43页 |
| ·DNA的连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2法)及转化 | 第43-44页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电穿孔 | 第44页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| ·IPTG诱导大肠杆菌中重组基因的表达 | 第45页 |
| ·PCR技术 | 第45页 |
| ·AT克隆 | 第45-46页 |
| ·苏云金芽胞杆菌RNA的抽提 | 第46页 |
| ·RNA电泳(甲醛凝胶电泳) | 第46-47页 |
| ·RNA的定量以及质量检测 | 第47页 |
| ·RT-PCR | 第47页 |
| ·SDS-PAGE和蛋白质的银染 | 第47-48页 |
| ·Western blot | 第48-49页 |
| ·抗血清的制备 | 第49-50页 |
| ·免疫双扩散定性检测抗体效价 | 第50页 |
| ·ELISA定量检测抗体效价 | 第50-51页 |
| ·蛋白质测序 | 第51页 |
| ·蛋白质组学双向电泳分离技术 | 第51-53页 |
| ·对棉铃虫毒力的生物测定和细胞毒性试验 | 第53页 |
| ·分子生物学操作软件及基本生物信息学分析方法 | 第53-54页 |
| 3.结果与分析 | 第54-91页 |
| ·与苏云金芽胞杆菌相关的生物信息学分析 | 第54-61页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因密码子组成分析 | 第54页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因内部重复序列分析 | 第54-55页 |
| ·ctc_1、ctc_2全基因重复序列分析 | 第55页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因上游启动子分析 | 第55-56页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因下游终止子分析 | 第56页 |
| ·ctc_1基因的上游基因分析 | 第56-57页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因全长比对结果 | 第57页 |
| ·CTC_1和CTC_2蛋白全长比对结果 | 第57页 |
| ·CTC_1蛋白N段和CTC_2蛋白N段比对结果 | 第57-58页 |
| ·CTC_1蛋白C段和CTC_2蛋白C段比对结果 | 第58页 |
| ·CTC_1蛋白C段和CTC_2蛋白C段基因序列比对结果 | 第58页 |
| ·CTC_1和CTC_2蛋白保守结构域SLH分析 | 第58页 |
| ·S-层蛋白的信号肽预测 | 第58-59页 |
| ·CTC_1蛋白和SAP蛋白比对结果 | 第59页 |
| ·CTC_2蛋白和EA1蛋白比对结果 | 第59页 |
| ·CTC_1-C和CTC_2-C末端多肽潜在的抗原决定簇分析 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| ·苏云金芽胞杆菌一类新的内涵体蛋白 | 第61-74页 |
| ·CTC菌株在不同pH环境下的生长曲线 | 第61页 |
| ·CTC菌株表面S-层的研究 | 第61-63页 |
| ·CTC菌株表面S-层的电镜观察 | 第61-62页 |
| ·CTC菌株表面S-层的冰冻蚀刻 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE检测CTC菌株表面S-层 | 第62页 |
| ·CTC菌株表面S-层的初抽提 | 第62-63页 |
| ·CTC菌株表面S-层蛋白测序结果 | 第63页 |
| ·UTC菌株芽胞期内涵体的研究 | 第63-66页 |
| ·CTC菌株芽胞期内涵体的电镜观察 | 第64页 |
| ·CTC菌株芽胞期内涵体的初抽提 | 第64-65页 |
| ·CTC菌株芽胞期内涵体蛋白测序结果 | 第65-66页 |
| ·CTC菌株芽胞期内涵体的表面结构 | 第66页 |
| ·Bt.菌株中类CTC菌株的普查 | 第66-73页 |
| ·CTC_1和CTC_2蛋白C末端特异性抗血清的制备 | 第66-69页 |
| ·62个Bt.菌株内涵体的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第69页 |
| ·62个Bt.菌株的PCR分析 | 第69-71页 |
| ·阳性菌株的基因克隆、测序和序列比对分析 | 第71页 |
| ·阳性菌株H20ac、T68、H61的基本生物学性状 | 第71-73页 |
| ·内涵体蛋白对棉铃虫的毒力和细胞毒性 | 第73页 |
| ·小 结 | 第73-74页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的S-层形成内涵体与低氧条件有关 | 第74-80页 |
| ·CTC菌株在不同培养条件下的生长状态 | 第74-76页 |
| ·在常规摇床中的发酵比较研究 | 第74页 |
| ·在固体平皿中的生长比较 | 第74-75页 |
| ·在发酵罐中的分批发酵比较研究 | 第75-76页 |
| ·不同通气条件下S-层形成内涵体的Western blot证据 | 第76-77页 |
| ·不同通气条件下S-层形成内涵体的RT-PCR证据 | 第77-78页 |
| ·在低氧条件下S-层形成内涵体的质谱证据 | 第78页 |
| ·低氧条件下其它菌株的S-层蛋白形成内涵体 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| ·苏云金芽胞杆菌中S-层功能的初步探索 | 第80-90页 |
| ·CTC菌株中S-层基因的突变结果 | 第80-87页 |
| ·S-层基因突变菌株的中间载体的构建 | 第80-82页 |
| ·苏云金芽胞杆菌野生菌株的电转化条件 | 第82-83页 |
| ·突变前的中间转化子BMB0549~*的获得 | 第83页 |
| ·突变前的中间转化子BMB0549~*的PCR验证 | 第83-84页 |
| ·通过双交换缺失CTC菌株的S-层基因示意图 | 第84-85页 |
| ·ctc_1和ctc_2基因突变菌株的筛选结果 | 第85页 |
| ·S-层基因突变菌株的验证 | 第85-87页 |
| ·CTC菌株S-层缺失株耐碱性实验结果 | 第87-88页 |
| ·通过蛋白质组学的方法研究S-层的功能 | 第88-89页 |
| ·样品蛋白质浓度测定 | 第88页 |
| ·突变株和野生株总蛋白的双向电泳 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| ·本文主要结果总结 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 附录 | 第102-111页 |
| 攻博期间的成果 | 第111页 |
