| 符号说明 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| ·基因沉默 | 第12-15页 |
| ·转录后基因沉默（PTGS）的发现简史 | 第12-13页 |
| ·PTGS 机制 | 第13-15页 |
| ·PTGS 的必需基因 | 第15页 |
| ·PTGS 与植物抗病毒研究 | 第15-19页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的提出 | 第15-16页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性的特点 | 第16-17页 |
| ·RNA 介导的病毒抗性是转录后基因沉默的结果 | 第17-18页 |
| ·hpRNA 与RNA 介导的病毒抗性 | 第18页 |
| ·shRNA(short hairpin RNA , shRNA)与 RNA 介导的病毒抗性 | 第18-19页 |
| ·核酸序列相似性与RNA 介导的病毒抗性 | 第19页 |
| ·多抗病毒基因工程策略 | 第19-21页 |
| ·本研究的立题依据和主要研究内容 | 第21-24页 |
| ·立题依据 | 第21-22页 |
| ·本研究主要研究内容 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-48页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·毒源 | 第24页 |
| ·供试植物 | 第24页 |
| ·菌株、质粒 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-48页 |
| ·烟草蚀纹病毒山东分离物全基因组序列的克隆 | 第24-34页 |
| ·目的片段（dsDNA）的获得 | 第34-35页 |
| ·植物重组表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达 | 第38页 |
| ·农杆菌介导的烟草基因转化及转基因烟草的获得 | 第38-39页 |
| ·植物总DNA 的提取（CTAB 法） | 第39页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第39页 |
| ·转基因植株的抗病性鉴定及ELISA 检测 | 第39-40页 |
| ·Northern blot 分析 | 第40-45页 |
| ·转基因植株siRNA 的提取及杂交分析 | 第45-47页 |
| ·T1 代转基因株系抗病性分析 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-68页 |
| ·烟草蚀纹病毒山东分离物全基因组序列的克隆 | 第48-49页 |
| ·靶序列的确定 | 第49-50页 |
| ·目的片段（dsDNA）的获得 | 第50页 |
| ·目的片段（dsDNA）与表达载体pROKⅡ的连接及重组载体的转化 | 第50-51页 |
| ·目的片段（dsDNA）与表达载体pROKⅡ的连接 | 第50页 |
| ·重组载体向大肠杆菌中的转化 | 第50-51页 |
| ·重组载体的菌落（质粒）PCR 鉴定 | 第51页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组表达载体向农杆菌中的转化 | 第52-53页 |
| ·shRNA 有效性检测 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第54-55页 |
| ·转化植株的PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·转基因植株的抗病性分析 | 第56-62页 |
| ·转基因烟草的Northern blot 分析 | 第62-63页 |
| ·转基因植株siRNA 的杂交分析 | 第63页 |
| ·siRNA 的活性依赖于有义链碱基的性质与靶mRNA 的位置 | 第63-66页 |
| ·shRNA 利用相似性介导的病毒抗性效率依赖于siRNA 与病毒间碱基错配的位置 | 第66页 |
| ·T1 代转基因株系抗病性分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
