| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| ·细菌中的冷激蛋白 | 第9-12页 |
| ·I 型冷激蛋白及其功能 | 第9-10页 |
| ·冷激蛋白CspA家族的作用 | 第10-12页 |
| ·冷激蛋白CspA家族的结构与结合位点 | 第12-13页 |
| ·冷激蛋白CspA家族的结构 | 第12-13页 |
| ·冷激蛋白CspA家族的结合位点 | 第13页 |
| ·冷激蛋白CspA的表达与调控 | 第13-19页 |
| ·冷激蛋白CspA核心启动子 | 第14页 |
| ·冷激蛋白CspA下游框 | 第14-15页 |
| ·cspA mRNA的5'-UTR | 第15-19页 |
| ·冷激启动子应用的研究 | 第19-20页 |
| ·本文的研究内容 | 第20-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-50页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·载体 | 第23页 |
| ·实验常用试剂配制 | 第23-29页 |
| ·实验方法 | 第29-41页 |
| ·大肠杆菌基因组DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·重组子转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| ·质粒的提取 | 第32-34页 |
| ·目的蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36-39页 |
| ·利用HIC树脂纯化ZsGreen蛋白 | 第39-41页 |
| ·实验过程 | 第41-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第41-46页 |
| ·E.colicspA启动子介导的ZsGreen转录水平研究 | 第46-48页 |
| ·E.colicspA启动子介导的ZsGreen翻译水平研究 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-76页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-57页 |
| ·cspA启动子片段的获得 | 第50-54页 |
| ·ZsGreen报告基因的获得与pT7-ZsGreen表达载体构建 | 第54-56页 |
| ·pCspA_1-ZsGreen、pCspA_2-ZsGreen与pCspA_3-ZsGreen载体构建 | 第56-57页 |
| ·E.colicspA启动子介导的ZsGreen转录水平研究 | 第57-71页 |
| ·pCspA_(1-3)-ZsGreen与pT7-ZsGreen表达RT-PCR分析 | 第58-60页 |
| ·RT-PCR反应循环数的设定 | 第60-62页 |
| ·E.colicspA启动子37℃下介导转录水平研究 | 第62-66页 |
| ·E.colicspA启动子16℃下介导转录水平研究 | 第66-68页 |
| ·cspA mRNA37℃下稳定性的研究 | 第68-70页 |
| ·cspA_1、cspA_2与cspA_3启动子活性比较 | 第70-71页 |
| ·E.colicspA启动子介导的ZsGreen翻译水平研究 | 第71-76页 |
| ·绿色荧光ZsGreen蛋白的表达 | 第71-72页 |
| ·pCspA_(1-3)-ZsGreen 16℃下翻译水平研究 | 第72-74页 |
| ·pT7-ZsGreen/pCspA_(1-3)-ZsGreen 16℃下翻译效率比较 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-84页 |
| ·AT区域的表达调控作用研究 | 第76页 |
| ·DB区域的表达调控作用研究 | 第76-77页 |
| ·cspA mRNA稳定性研究 | 第77-78页 |
| ·阻遏冷激后CspA合成机制研究 | 第78-79页 |
| ·低温下表达蛋白活性研究 | 第79-80页 |
| ·低温诱导表达载体的应用价值 | 第80-82页 |
| ·问题及展望 | 第82-84页 |
| 5 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
