| 第一章 绪论 | 第1-32页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合症病原学研究进展 | 第13-23页 |
| ·病毒起源之说 | 第14-15页 |
| ·病毒的分类地位 | 第15-17页 |
| ·病毒的形态与发生 | 第17-18页 |
| ·病毒的培养与细胞受体 | 第18-19页 |
| ·致病机理 | 第19-20页 |
| ·PRRSV基因组 | 第20-22页 |
| ·PRRSV在猪体内的分布 | 第22-23页 |
| ·巢状病毒3C样蛋白酶研究进展 | 第23-31页 |
| ·命名 | 第24-25页 |
| ·同源性分析 | 第25页 |
| ·活性中心 | 第25-27页 |
| ·底物酶切位点的特异性 | 第27-28页 |
| ·巢状病毒主要蛋白酶的3D结构 | 第28-31页 |
| ·研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二章 PRRSV非结构蛋白NSP4及其突变体的克隆与表达 | 第32-56页 |
| ·前言 | 第32-33页 |
| ·材料与试剂 | 第33-36页 |
| ·病毒 | 第33页 |
| ·载体、引物与菌株 | 第33页 |
| ·工具酶与试剂 | 第33-35页 |
| ·主要溶液与培养基配制 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-44页 |
| ·病毒 | 第36页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR | 第37页 |
| ·DNA片断的回收 | 第37-38页 |
| ·限制性酶切消化 | 第38页 |
| ·DNA片断和载体的连接 | 第38页 |
| ·冷氯化钙法制备新鲜感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·高效感受态细胞制备方法 | 第39页 |
| ·常规转化法 | 第39页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第40页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·基因测序 | 第40页 |
| ·细菌的培养及菌种保存 | 第40-41页 |
| ·重叠延伸法定点诱变PRRSV NSP4基因 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·菌体的收获和破碎 | 第43页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·重组表达蛋白的WESTERN-BLOT分析 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-54页 |
| ·PRRSV NSP4基因的RT-PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·重叠延伸法定点诱变PRRSV NSP4基因 | 第45-46页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第47页 |
| ·重组表达质粒的DNA序列测定 | 第47-49页 |
| ·诱导表达和纯化 | 第49-53页 |
| ·重组表达蛋白的Western-blot鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 PRRSV非结构蛋白NSP4生化特性的研究 | 第56-74页 |
| ·前言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-59页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·储备液、实验溶液 | 第57页 |
| ·仪器设备 | 第57页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第57-58页 |
| ·底物多肽的酶切 | 第58页 |
| ·酶切产物的HPLC分析 | 第58页 |
| ·酶切产物的质谱分析 | 第58页 |
| ·重组表达蛋白的的分子筛层析分析 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-71页 |
| ·底物多肽酶切产物的HPLC分析 | 第59-63页 |
| ·质谱分析 | 第63-65页 |
| ·重组表达蛋白的的分子筛层析分析 | 第65-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 PRRSV非结构蛋白NSP4结构的研究 | 第74-94页 |
| ·前言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-79页 |
| ·圆二色光谱的测定 | 第74-76页 |
| ·PRRSV NSP4氨基酸序列BLAST | 第76页 |
| ·PRRSV NSP4三维结构的同源模建 | 第76-78页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型结构合理性的评估 | 第78页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型结构相似性搜索 | 第78-79页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型与马动脉炎病毒NSP4 3D结构的叠合 | 第79页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型与底物多肽的分子对接 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-91页 |
| ·PRRSV NSP4圆二色光谱的测定 | 第79-83页 |
| ·PRRSV NSP4氨基酸序列的BLAST | 第83-84页 |
| ·PRRSV NSP4的3D模型 | 第84-86页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型结构合理性的评估 | 第86-88页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型结构相似性搜索 | 第88-89页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型与EAV NSP4 3D结构的叠合 | 第89-90页 |
| ·PRRSV NSP4 3D模型与底物多肽的分子对接 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-94页 |
| 第五章 研究总结 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
