| 第一章 绪论 | 第1-24页 |
| ·RNAi的发现与发展 | 第14-15页 |
| ·RNAi的相关因子及机制模型 | 第15-17页 |
| ·RNAi的相关因子 | 第15-16页 |
| ·Dicer是RNAi的启动因子 | 第15页 |
| ·RISC是RNAi的效应因子 | 第15-16页 |
| ·RdRPs为RNAi扩大效应所必需 | 第16页 |
| ·RNAi的机制模型 | 第16-17页 |
| ·RNAi的作用特征 | 第17页 |
| ·具有高度的特异性 | 第17页 |
| ·RNAi效应具有高效性 | 第17页 |
| ·RNAi存在放大效应 | 第17页 |
| ·siRNA为RNAi产生效应的中介分子 | 第17页 |
| ·RNAi需要ATP参与其效应 | 第17页 |
| ·其他的沉默机制 | 第17-18页 |
| ·转录水平基因沉默 | 第17-18页 |
| ·miRNA诱导内在的RNAi | 第18页 |
| ·RNAi的生物学功能 | 第18-20页 |
| ·抗病毒感染免疫 | 第18-19页 |
| ·维持基因组中转座子的稳定性 | 第19页 |
| ·清除异常RNA | 第19页 |
| ·基因表达调控 | 第19-20页 |
| ·dsRNA的生成方式 | 第20-21页 |
| ·通过RNA依赖的RNA聚合酶合成dsRNA | 第20页 |
| ·转座子产生dsRNA | 第20页 |
| ·构建表达dsRNA的质粒转入细胞表达dsRNA | 第20-21页 |
| ·siRNA的生成方式 | 第21-22页 |
| ·化学合成siRNA | 第21页 |
| ·体外转录法 | 第21页 |
| ·体内载体表达法 | 第21页 |
| ·体外酶切法 | 第21-22页 |
| ·RNAi技术在哺乳动物、昆虫中的应用 | 第22-23页 |
| ·RNAi技术在哺乳动物中的应用 | 第22页 |
| ·RNAi技术在昆虫中的应用 | 第22-23页 |
| ·小结 | 第23-24页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第三章 一般实验材料和方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·质粒和菌种 | 第25页 |
| ·昆虫细胞 | 第25页 |
| ·酶试剂及试剂盒 | 第25页 |
| ·其它主要试剂 | 第25页 |
| ·细菌培养基 | 第25页 |
| ·昆虫细胞培养基 | 第25-26页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第26-27页 |
| ·所用主要仪器和设备 | 第27页 |
| ·一般实验方法 | 第27-33页 |
| ·细胞的传代 | 第27页 |
| ·细胞的冻存 | 第27页 |
| ·细胞的复苏 | 第27页 |
| ·细胞计数 | 第27-28页 |
| ·dsRNA与BmNPV基因组DNA的共转染 | 第28页 |
| ·dsRNA转染后病毒母液感染细胞 | 第28页 |
| ·病毒滴度测定 | 第28页 |
| ·DNA浓度测定 | 第28页 |
| ·dsRNA浓度测定 | 第28-29页 |
| ·BmNPV基因组DNA提取 | 第29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| ·碱法少量快速抽提质粒DNA | 第29-30页 |
| ·碱法大量制备质粒DNA | 第30页 |
| ·限制性内切酶反应 | 第30页 |
| ·DNA片段的分离与回收 | 第30-31页 |
| ·DNA的连接 | 第31页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·利用Promega公司Kit进行体外转录dsRNA | 第32-33页 |
| 第四章 ie-1基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制增殖的抑制研究 | 第33-42页 |
| ·材料与方法 | 第33-36页 |
| ·试验材料与试剂 | 第33页 |
| ·病毒扩增及BmNPV基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·引物的合成 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·ie-1基因部分片段的克隆及测序 | 第35页 |
| ·体外转录合成dsRNA I1 | 第35页 |
| ·细胞转染 | 第35页 |
| ·dsRNA与BmNPV基因组DNA的共转染 | 第35页 |
| ·dsRNA I1转染的细胞用病毒母液感染 | 第35页 |
| ·病毒滴度测定 | 第35-36页 |
| ·病毒滴度(TCID50／mL)的计算方法 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·BmNPV基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·dsRNA I1的制备 | 第36页 |
| ·dsRNA I1与BmNPV DNA共转染对病毒增殖的抑制效果 | 第36页 |
| ·dsRNA I1转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第36-39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| 第五章 gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制增殖的抑制研究 | 第42-53页 |
| ·试验材料与试剂 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·病毒扩增及BmNPV基因组DNA的提取 | 第42页 |
| ·引物的合成 | 第42-44页 |
| ·体外合成大片段dsRNA | 第44页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·gp64基因部分片段的克隆及测序 | 第44页 |
| ·体外转录合成长片段dsRNAG1、G2、G3 | 第44页 |
| ·体外合成小片段dsRNA | 第44-45页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·体外转录合成dsRNA G3-1、G3-2、G3-3 | 第44-45页 |
| ·细胞转染 | 第45页 |
| ·G3与BmNPV基因组DNA的共转染 | 第45页 |
| ·dsRNA转染的细胞用病毒母液感染 | 第45页 |
| ·病毒滴度测定 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·BmNPV基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·长片段dsRNA的制备 | 第45页 |
| ·PCR扩增长度为100bp左右的gp64基因片段 | 第45页 |
| ·小片段dsRNA的制备 | 第45-46页 |
| ·dsRNA G1、G2、G3转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第46页 |
| ·G3与病毒基因组DNA共转染对病毒增殖的抑制效果 | 第46-47页 |
| ·包埋脂质体用量与dsRNA G3对病毒粒子增殖抑制效果的关系 | 第47页 |
| ·小片段dsRNA转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-53页 |
| 第六章 解旋酶基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制增殖的抑制研究 | 第53-57页 |
| ·试验材料与试剂 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·病毒扩增及BmNPV基因组DNA的提取 | 第53页 |
| ·引物的合成 | 第53-54页 |
| ·BmNPV的helicase基因部分片段的克隆及测序 | 第54页 |
| ·体外转录合成dsRNA H1 | 第54-55页 |
| ·dsRNA转染的细胞用病毒母液感染 | 第55页 |
| ·病毒滴度测定 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55页 |
| ·BmNPV基因组DNA的提取 | 第55页 |
| ·干扰用dsRNA的制备 | 第55页 |
| ·dsRNA H1转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第七章 抑制不同靶基因对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果比较 | 第57-62页 |
| ·材料与方法 | 第57页 |
| ·生物材料与试剂 | 第57页 |
| ·细胞转染 | 第57页 |
| ·病毒滴度测定 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·转染I1、G3、H1对病毒粒子感染增殖的抑制比较 | 第57-59页 |
| ·转染I1、H1、I1+H1对病毒粒子感染增殖的抑制分析 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 第八章 全文结论 | 第62-65页 |
| ·ie-1基因相应dsRNA对BmNPV复制增殖的抑制 | 第62页 |
| ·ie-1基因片段克隆与体外转录合成dsRNA | 第62页 |
| ·dsRNA I1转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第62页 |
| ·gp64基因相应dsRNA对BmNPV复制增殖的抑制 | 第62-63页 |
| ·体外转录合成较长片段的dsRNA | 第62页 |
| ·体外转录合成较短片段的dsRNA | 第62-63页 |
| ·gp64基因长片段dsRNA对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第63页 |
| ·短片段dsRNA转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第63页 |
| ·早期基因helicase相应dsRNA对BmNPV的抑制效果 | 第63-64页 |
| ·helicase基因片段克隆与体外转录合成dsRNA | 第63页 |
| ·dsRNA转染对病毒粒子感染增殖的抑制 | 第63-64页 |
| ·抑制不同靶基因对BmNPV增殖的抑制效果比较研究 | 第64页 |
| ·包埋dsRNA的脂质体的用量对滴度抑制效果的影响 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附录 | 第71-81页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
