| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-27页 |
| ·成骨细胞转录因子Osterix的简介 | 第9-13页 |
| ·Osterix基因的发现及其结构 | 第9-10页 |
| ·Osterix在成骨发育中的功能 | 第10-13页 |
| ·与Osterix相关的信号通路及转录因子的简介 | 第13-19页 |
| ·与Osterix相关的信号通路 | 第13-16页 |
| ·与Osterix相关的转录因子 | 第16-18页 |
| ·Osterix与其他成骨相关转录因子的关系 | 第18-19页 |
| ·腺病毒载体的简介与研究进展 | 第19-25页 |
| ·腺病毒的结构特征与感染周期 | 第19-20页 |
| ·腺病毒载体的构建: | 第20-21页 |
| ·腺病毒载体的优缺点 | 第21-22页 |
| ·AdEasy载体系统的介绍 | 第22-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| ·实验技术路线简图 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料与仪器 | 第27-33页 |
| ·菌株、质粒、引物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·常用试剂配方 | 第29-33页 |
| 第三章 成骨相关转录因予Osterix的重组腺病毒载体的构建 | 第33-46页 |
| ·实验方法 | 第33-43页 |
| ·Osx基因的体外扩增和克隆 | 第33-40页 |
| ·构建含有Osx基因的腺病毒重组质粒 | 第40-43页 |
| ·实验结果 | 第43-46页 |
| ·pAdTrack-CMV-Osx穿梭质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·Osx腺病毒重组载体的构建 | 第44-46页 |
| 第四章 重组腺病毒颗粒的包装、扩增及收集 | 第46-56页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·重组的腺病毒质粒转染293A细胞 | 第46-49页 |
| ·重组腺病毒颗粒的收集、扩增 | 第49-52页 |
| ·实验结果 | 第52-56页 |
| ·正常的293A细胞图 | 第52-53页 |
| ·重组腺病毒载体转染的293A细胞的绿色荧光照片 | 第53-54页 |
| ·293A细胞病变效应细胞图 | 第54页 |
| ·腺病毒滴度 | 第54-55页 |
| ·转染的293A细胞裂解液的PCR结果 | 第55-56页 |
| 第五章 重组腺病毒转染C2C12及其对细胞周期的影响 | 第56-67页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·重组病毒颗粒感染C2C12细胞效率测定 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR检测受感染的C2C12细胞中Osx的转录 | 第57-58页 |
| ·细胞直接裂解做Western Blotting | 第58-60页 |
| ·生长曲线的测定: | 第60页 |
| ·流式细胞仪测定细胞周期 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-67页 |
| ·重组腺病毒感染C2C12细胞的效率 | 第61-62页 |
| ·被感染的C2C12细胞的RT-PCR结果 | 第62-63页 |
| ·被感染的C2C12细胞的Western Blotting结果 | 第63-64页 |
| ·腺病毒感染后的C2C12细胞的生长曲线 | 第64-65页 |
| ·Osx对C2C12细胞周期的影响 | 第65-67页 |
| 第六章 讨论 | 第67-75页 |
| ·AdEasy系统使用的经验总结: | 第67-72页 |
| ·腺病毒的重组反应可以发生在两个部位 | 第67-68页 |
| ·腺病毒感染细胞时间与实验设计的关系 | 第68-69页 |
| ·PFU方法计算腺病毒滴度 | 第69-70页 |
| ·腺病毒颗粒的收集 | 第70页 |
| ·MOI(感染复数)对转染效率的影响 | 第70-72页 |
| ·Osterix对C2C12细胞的细胞周期产生影响 | 第72-73页 |
| ·Osterix用于基因治疗骨组织损伤的前景展望 | 第73-75页 |
| 第七章 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
