| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-21页 |
| ·透明质酸的理化性质 | 第12-13页 |
| ·透明质酸的分布及应用 | 第13页 |
| ·透明质酸的制备方法 | 第13-14页 |
| ·动物组织提取法 | 第13-14页 |
| ·微生物发酵法 | 第14页 |
| ·透明质酸生产菌 | 第14-18页 |
| ·链球菌透明质酸生产菌的毒力因子 | 第14-16页 |
| ·链球菌透明质酸的合成途径 | 第16-17页 |
| ·透明质酸合成酶及其操纵子 | 第17页 |
| ·透明质酸工程菌的构建 | 第17-18页 |
| ·菌株hasABC基因拷贝数与透明质酸的生产 | 第18页 |
| ·课题研究目的 | 第18-19页 |
| ·课题研究的内容 | 第19-20页 |
| ·透明质酸生产菌的分离鉴定 | 第19页 |
| ·马链球菌兽疫亚种毒力基因缺失突变株构建 | 第19页 |
| ·双拷贝hasABC基因工程菌的构建 | 第19-20页 |
| ·课题研究的技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 透明质酸生产菌的分离鉴定 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·菌种来源 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·试剂盒 | 第21-22页 |
| ·革兰氏染色液 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·菌种的分离 | 第22页 |
| ·革兰氏染色法 | 第22页 |
| ·菌种基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·细菌16S rDNA鉴定 | 第23-24页 |
| ·用Bitter-Muir法制作透明质酸含量标准曲线 | 第24页 |
| ·菌株生长曲线的测定 | 第24页 |
| ·发酵液中透明质酸含量测定 | 第24页 |
| ·结果与讨论 | 第24-27页 |
| ·菌落和菌体特征 | 第24-25页 |
| ·基因组DNA和16S rDNA基因PCR扩增产物 | 第25页 |
| ·16Sr DNA序列对比分析 | 第25-26页 |
| ·Bitter-Muir法标准曲线 | 第26页 |
| ·菌种的生长与透明质酸的关系 | 第26-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 马链球菌兽疫亚种血红素受体基因缺失突变株的构建 | 第28-40页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·酶、试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| ·马链球菌兽疫亚种染色体DNA提取 | 第29页 |
| ·血红素蛋白受体缺失突变株的构建 | 第29-34页 |
| ·血红素蛋白受体基因缺失突变株的确定 | 第34-35页 |
| ·突变株链黑霉素敏感性实验 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·PCR扩增血红素蛋白受体基因 | 第35页 |
| ·ClaⅠ酶切PCR产物和质粒载体pJR700 | 第35-36页 |
| ·携带血红素蛋白受体基因的质粒载体pXL28构建 | 第36页 |
| ·血红素蛋白受体基因缺失载体pJR700△shr质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·马链球菌兽疫亚种血红素蛋白受体基因缺失株的构建 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第4章 双拷贝hasABC基因工程菌的构建 | 第40-48页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·质粒及试剂盒 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·马链球菌兽疫亚种基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·PCR扩增hasABC基因 | 第40-41页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第41页 |
| ·电泳检验PCR产物 | 第41页 |
| ·PCR纯化产物与pJR700质粒的酶切 | 第41页 |
| ·酶切hasABC和pJR700质粒的酶连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·pXL31质粒电转化入受体DH5α感受态细胞 | 第42页 |
| ·pXL31质粒的提取 | 第42页 |
| ·重组pXL31质粒的鉴定 | 第42页 |
| ·血红素蛋白受体基因缺失突变株感受态细胞的制作 | 第42页 |
| ·pXL31质粒电转化入血红素蛋白受体基因缺失突变株 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE分析重组菌hasABC基因表达 | 第42-44页 |
| ·重组菌与非重组菌产透明质酸的测定 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·PCR扩增hasABC基因 | 第44-45页 |
| ·携带hasABC基因质粒pXL31构建 | 第45页 |
| ·pXL31质粒的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE分析hasABC工程菌蛋白表达 | 第46页 |
| ·hasABC工程菌生产透明质酸结果分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 | 第54页 |
