| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 第一章 呼吸道合胞病毒的生物学特性及其治疗和预防 | 第13-26页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·RSV的生物学和分子生物学 | 第13-15页 |
| ·RSV的流行病学 | 第15-17页 |
| ·RSV感染的免疫应答及发病机理 | 第17-21页 |
| ·T、B淋巴细胞 | 第18页 |
| ·CD_4~+和CD_8~+T淋巴细胞亚群及其细胞因子 | 第18-19页 |
| ·嗜酸性粒细胞(EOS)及嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 | 第19-20页 |
| ·趋化因子 | 第20页 |
| ·黏附分子 | 第20-21页 |
| ·IgE、IgG4抗体和其它 | 第21页 |
| ·病毒感染治疗和预防 | 第21-26页 |
| ·RSV感染的传统治疗方法 | 第21-22页 |
| ·RSV感染的基因治疗 | 第22-26页 |
| 第二章 筛选差异表达基因的方法及应用 | 第26-36页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·筛选差异表达基因的方法 | 第26-32页 |
| ·mRNA差异展示技术 | 第26-28页 |
| ·消减杂交技术 | 第28-31页 |
| ·RNA任意引物PCR | 第31-32页 |
| ·从EST出发快速鉴定新的差异表达基因 | 第32-35页 |
| ·发现表达基因的新战略 | 第32-33页 |
| ·利用EST电子杂交基因克隆 | 第33-34页 |
| ·EST应用中应注意解决的问题 | 第34-35页 |
| ·展望 | 第35-36页 |
| 第三章 SPC-A1细胞应答RSV感染的mRNA差异显示谱的研究 | 第36-46页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-40页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36-37页 |
| ·细胞培养与病毒感染 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第39页 |
| ·PCR反应 | 第39页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和银染 | 第39-40页 |
| ·二次PCR扩增和差异显示带回收 | 第40页 |
| ·T-A克隆与测序 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·细胞病变与RNA提取 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增条件优化 | 第41页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染 | 第41-42页 |
| ·克隆、测序和相似性检索 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-46页 |
| ·RNA的提取和反转录 | 第43-44页 |
| ·差异显示方法改进 | 第44页 |
| ·差异表达基因与功能分析 | 第44-46页 |
| 第四章 SPC-A1细胞应答RSV感染的敏感基因zlg10的克隆及其编码蛋白亚细胞定位的研究 | 第46-61页 |
| ·材料与方法 | 第46-52页 |
| ·毒株和细胞 | 第46页 |
| ·酶及试剂 | 第46-47页 |
| ·溶液配制及处理 | 第47页 |
| ·电子克隆的基本原理及步骤 | 第47页 |
| ·含完整编码区的cDNA的克隆及验证 | 第47-50页 |
| ·Northern Blot杂交分析 | 第50页 |
| ·EGFP融合蛋白表达载体的构建及转染 | 第50-52页 |
| ·结果 | 第52-59页 |
| ·新基因片段g10-1的克隆及测序 | 第52-53页 |
| ·新基因片段g10-1的鉴定 | 第53页 |
| ·电子延伸结果、开放阅读框架及序列特征 | 第53-55页 |
| ·蛋白质的特点及功能区的分析 | 第55页 |
| ·zlg10的疏水性分析 | 第55-56页 |
| ·zlg10跨膜区的分析 | 第56页 |
| ·Northem Blot杂交分析 | 第56-57页 |
| ·含完整编码区的cDNA的克隆及验证 | 第57-58页 |
| ·细胞内EGFP融合蛋白的观察及定位 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 SPC-A1细胞应答RSV感染的敏感蛋白ZLG10的表达与纯化 | 第61-75页 |
| ·材料与方法 | 第61-67页 |
| ·毒株和细胞 | 第61页 |
| ·质粒和菌株 | 第61页 |
| ·工具酶、试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂与溶液 | 第62-63页 |
| ·亲和层析及蛋白纯化相关试剂 | 第63-64页 |
| ·引物设计与合成 | 第64页 |
| ·重组表达载体pGEX-4T-zlg10的构建 | 第64-65页 |
| ·GST-ZLG10融合蛋白的原核表达电泳样品制备 | 第65页 |
| ·表达产物的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第65-66页 |
| ·GSH亲和层析纯化GST-ZLG10融合蛋白 | 第66-67页 |
| ·结果 | 第67-72页 |
| ·zlg10基因的逆转录PCR扩增及鉴定 | 第67页 |
| ·原核表达载体pGEX-4T-zlg10的构建及酶切鉴定 | 第67-69页 |
| ·GST-ZLG10融合蛋白的表达和纯化 | 第69-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第六章 ZLG10特异性抗血清的制备及其功能研究 | 第75-85页 |
| ·材料和方法 | 第75-78页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·溶液配制 | 第75-76页 |
| ·兔抗GST-ZLG10融合蛋白多克隆抗血清的制备和纯化 | 第76页 |
| ·ELISA法测定兔抗GST-ZLG10抗体的滴度 | 第76页 |
| ·Western blot分析兔抗GST-ZLG10抗体的特异性 | 第76-77页 |
| ·不同方式下ZLG10抗血清对病毒感染的抑制情况 | 第77-78页 |
| ·结果 | 第78-84页 |
| ·兔抗GST-ZLG10多克隆抗血清的制备和纯化 | 第78页 |
| ·兔抗ZLG10多克隆抗血清抑制RSV感染的效果 | 第78-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| 研究总结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-103页 |
| 在读期间发表的文章 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
