| 1 前言 | 第1-18页 |
| ·透明带概述 | 第8-9页 |
| ·卵透明带的结构 | 第8页 |
| ·卵透明带的生理功能 | 第8-9页 |
| ·卵透明带在生育研究中的作用 | 第9-14页 |
| ·抗生育研究 | 第9-13页 |
| ·病理研究 | 第13-14页 |
| ·本研究课题的立论依据 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| ·本研究的技术路线 | 第16-18页 |
| 2 实验仪器、材料和试剂 | 第18-21页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-21页 |
| 3 实验方法 | 第21-35页 |
| ·构建重组基因表达质粒 | 第21-26页 |
| ·PCR扩增目的基因片段--人卵透明带ZP3蛋白基因片段 | 第21-22页 |
| ·载体pPIC9K的制备 | 第22-23页 |
| ·扩增片段和载体的双酶切 | 第23-24页 |
| ·外源基因与载体的连接 | 第24页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌DH5α的转化 | 第25页 |
| ·转化子的检测和鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组外源基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达 | 第26-35页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的筛选与表达蛋白的鉴定 | 第27-30页 |
| ·培养条件的优化 | 第30-32页 |
| ·发酵罐高密度培养转化子 | 第32-33页 |
| ·亲和层析纯化目的蛋白及其反应原性分析 | 第33-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-43页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增结果 | 第35页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定结果 | 第35-37页 |
| ·重组质粒的序列测定结果 | 第37页 |
| ·嗜甲醇酵母的转化结果 | 第37页 |
| ·阳性克隆的鉴定结果 | 第37页 |
| ·多拷贝插入转化子的筛选 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·培养条件优化结果 | 第39-41页 |
| ·甲醇浓度优化结果 | 第39-40页 |
| ·培养液的pH值优化结果 | 第40-41页 |
| ·发酵罐高密度培养转化子 | 第41页 |
| ·目的蛋白的纯化及反应原性分析 | 第41-43页 |
| 5 讨论和小结 | 第43-49页 |
| ·酵母表达系统表达人卵透明带ZP3蛋白的优缺点 | 第43-45页 |
| ·重组质粒的构建结果分析 | 第45-46页 |
| ·酵母细胞转化和高拷贝高表达转化子的筛选分析 | 第46-47页 |
| ·目的基因在酵母细胞中的表达及纯化分析 | 第47-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 论文发表情况 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录一 各种试剂配制方法 | 第56-61页 |
| 附录二 重组质粒测序结果 | 第61-63页 |