| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| S100B基因的克隆、原核表达及生物学活性研究 | 第9-43页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 研究总技术线路 | 第11-12页 |
| 实验材料 | 第12-19页 |
| 1 常用生化试剂 | 第12-13页 |
| 2 主要仪器设备 | 第13-14页 |
| 3 质粒与菌株 | 第14-15页 |
| 4 培养基及常用溶液的配制 | 第15-19页 |
| 实验方法 | 第19-33页 |
| 1 S100B基因克隆与序列分析 | 第19-26页 |
| ·S100B基因克隆技术路线 | 第19-20页 |
| ·S100B基因重组质粒构建示意图 | 第20页 |
| ·组织总RNA提取 | 第20-21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第21-23页 |
| ·PCR产物DNA片段回收 | 第23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·质粒重组及鉴定 | 第24-25页 |
| ·S100B克隆基因序列测定 | 第25页 |
| ·序列的比较分析 | 第25-26页 |
| 2 MBS融合蛋白在原核表达载体pMAL-c2x中的表达 | 第26-33页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| ·pTS融合基因与pMAL-c2x的重组质粒构建示意图 | 第27页 |
| ·表达融合蛋白重组质粒pMAL-S100B的构建过程 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白MBS的表达 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第29页 |
| ·Western blot(蛋白印迹法) | 第29-30页 |
| ·TB1(pMS)的大量诱导表达 | 第30页 |
| ·融合蛋白在细胞内的定位(即可溶性分析) | 第30页 |
| ·融合蛋白MBS的纯化 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白MBS免疫兔血清的制备 | 第31页 |
| ·ELISA法检测兔血清效价 | 第31-33页 |
| 结果与分析 | 第33-43页 |
| 1 S100B基因的克隆与同源性分析 | 第33-36页 |
| ·组织和细胞总RNA提取 | 第33页 |
| ·S100B基因RT-PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·S100B基因的克隆及鉴定 | 第34-36页 |
| 2 融合蛋白MBS在TB1(pMS)中的表达 | 第36-41页 |
| ·重组质粒pMS的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白MBS的诱导表达结果 | 第37-38页 |
| ·Western blot鉴定融合蛋白MBS | 第38-39页 |
| ·表达蛋白可溶性分析结果 | 第39页 |
| ·融合蛋白pMS在TB1(pMS)中表达条件的优化 | 第39-41页 |
| ·融合蛋白MBS亲和层析纯化结果 | 第41页 |
| 3 融合蛋白MBS的生物学活性检测 | 第41-43页 |
| ·免疫血清的制备及血清效价测定 | 第41-42页 |
| ·免疫兔血清抗体成分分析 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 综述 | 第52-64页 |
| 英文略缩词 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
