| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 植物的抗寒生理及分子基础 | 第12-13页 |
| 1．1 植物抗寒生理 | 第12页 |
| 1．2 植物的冷诱导基因 | 第12-13页 |
| 2 植物抗寒基因工程 | 第13-19页 |
| 2．1 导入抗寒功能基因的研究 | 第14-18页 |
| 2．1．1 抗渗透胁迫相关基因的转移策略 | 第14-15页 |
| 2．1．1．1 COR基因 | 第14页 |
| 2．1．1．2 渗透调节相关酶基因 | 第14-15页 |
| 2．1．2 脂肪酸代谢策略 | 第15-16页 |
| 2．1．3 抗冻蛋白基因转移策略 | 第16-17页 |
| 2．1．4 活性氧清除转基因策略 | 第17-18页 |
| 2．2 导入抗寒调控基因的研究 | 第18-19页 |
| 2．2．1 CBF的结构特点 | 第18-19页 |
| 2．2．2 CBF基因与抗寒性 | 第19页 |
| 3 前景展望 | 第19-21页 |
| 引言 | 第21-23页 |
| 第二部分 植物表达载体的构建 | 第23-45页 |
| 1 材料与方法 | 第23-37页 |
| 1．1 材料 | 第23页 |
| 1．1．1 植物DNA材料 | 第23页 |
| 1．1．2 质粒与菌株 | 第23页 |
| 1．1．3 分子生物学试剂 | 第23页 |
| 1．1．4 培养基及试剂的配置 | 第23页 |
| 1．2 实验方法 | 第23-30页 |
| 1．2．1 基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 1．2．2 PCR产物的纯化 | 第24页 |
| 1．2．3 目的基因片段和T载体的TA克隆 | 第24-25页 |
| 1．2．4 菌斑的Colony PCR | 第25页 |
| 1．2．5 目的片段与载体的酶切及连接 | 第25-27页 |
| 1．2．5．1 对称性粘性匹配末端的酶切及连接 | 第25-26页 |
| 1．2．5．2 不对称非匹配末端的酶切和连接 | 第26-27页 |
| 1．2．5．3 平端线型DNA自环化 | 第27页 |
| 1．2．6 大肠杆菌质粒DNA的提取、感受态的制备及转化 | 第27-29页 |
| 1．2．6．1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| 1．2．6．2 大肠杆菌细胞的制备（TSS一步法） | 第28页 |
| 1．2．6．3 大肠杆菌的转化 | 第28-29页 |
| 1．2．7 农杆菌LBA4404感受态的制备、转化、质粒DNA的提取及验证 | 第29-30页 |
| 1．2．7．1 农杆菌感受态的制备（CaCl_2法） | 第29页 |
| 1．2．7．2 将表达载体转入农杆菌中（冻融法） | 第29-30页 |
| 1．3 载体构建方案 | 第30-37页 |
| 1．3．1 中间载体pRD29A-GUS的构建流程图 | 第30-31页 |
| 1．3．2 植物表达载体pBIN~+-RD29A-GUS构建流程图 | 第31-32页 |
| 1．3．3 中间载体pVCT2011构建流程图 | 第32-33页 |
| 1．3．4 中间载体pVCT2012的构建流程图 | 第33-34页 |
| 1．3．5 植物表达载体pBIN~+-RD29A-CBF3的构建流程图 | 第34-35页 |
| 1．3．6 中间载体pVCT2014的构建流程图 | 第35-36页 |
| 1．3．7 植物表达载体pBIN~+-RD29A-CBF3的构建流程图 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2．1 RD29A基因启动子片段的分离与克隆 | 第37-38页 |
| 2．2 中间载体pRD29A-GUS的构建及鉴定 | 第38页 |
| 2．3 植物表达载体pBIN~+-RD29A-GUS的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 2．4 中间载体pVCT2011的构建及鉴定 | 第39页 |
| 2．5 转录因子CBF3基因片段的分离与克隆 | 第39-40页 |
| 2．6 中间载体pVCT2012的构建及鉴定 | 第40页 |
| 2．7 植物表达载体pBIN~+-RD29A-CBF3的构建及鉴定 | 第40-41页 |
| 2．8 中间载体pVCT2014的构建及鉴定 | 第41页 |
| 2．9 植物表达载体pBIN~+-35S-CBF3的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| 2．10 植物表达载体pBIN~+-RD29A-GUS、pBIN~+-RD29A-CBF3和pBIN~+-35S-CBF3转化农杆菌及鉴定 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第三部分 冷诱导启动子P-RD29A冷诱导活性的研究 | 第45-48页 |
| 1 材料与方法 | 第45页 |
| 1．1 材料 | 第45页 |
| 1．2 方法 | 第45页 |
| 1．2．1 植物材料的获得及处理 | 第45页 |
| 1．2．2 GUS活性组织化学染色检测 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第四部分 遗传转化研究 | 第48-60页 |
| 1 农杆菌介导的黄瓜遗传转化 | 第48-56页 |
| 1．1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1．1．1 材料 | 第48页 |
| 1．1．2 方法 | 第48-50页 |
| 1．1．2．1 无菌外植体材料的获得 | 第48页 |
| 1．1．2．2 试管苗生长培养基的优化 | 第48页 |
| 1．1．2．3 生根培养基的优化 | 第48-49页 |
| 1．1．2．4 Kan选择压的确定 | 第49页 |
| 1．1．2．5 最适抑菌剂浓度的确定 | 第49页 |
| 1．1．2．6 黄瓜的遗传转化 | 第49-50页 |
| 1．2 结果与分析 | 第50-55页 |
| 1．2．1 不同激素浓度对黄瓜试管苗生长的影响 | 第50-51页 |
| 1．2．2 不同NAA浓度对黄瓜试管苗生根的影响 | 第51页 |
| 1．2．3 Kan选择压的确定 | 第51-52页 |
| 1．2．4 Carb和Amp抑菌剂浓度对抑菌和芽分化的影响 | 第52-53页 |
| 1．2．5 预培养时间对转化的影响 | 第53页 |
| 1．2．6 感菌时间对转化的影响 | 第53页 |
| 1．2．7 共培养时间对转化的影响 | 第53-54页 |
| 1．2．8 转基因黄瓜抗性植株的获得 | 第54页 |
| 1．2．9 转基因黄瓜植株的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 1．3 讨论 | 第55-56页 |
| 2 农杆菌介导的小番茄遗传转化 | 第56-60页 |
| 2．1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 2．1．1 材料 | 第56页 |
| 2．1．2 方法 | 第56-57页 |
| 2．1．2．1 无菌外植体材料的获得 | 第56-57页 |
| 2．1．2．2 芽分化培养基的优化 | 第57页 |
| 2．1．2．3 生根培养基的优化 | 第57页 |
| 2．1．2．4 Kan选择压的确定 | 第57页 |
| 2．1．2．5 小番茄的遗传转化 | 第57页 |
| 2．2 结果与分析 | 第57-59页 |
| 2．2．1 不同BA、ZT浓度对小番茄不定芽分化的影响 | 第57-58页 |
| 2．2．2 不同NAA浓度对小番茄苗生根的影响 | 第58页 |
| 2．2．3 Kan筛选压的确定 | 第58页 |
| 2．2．4 转基因小番茄抗性芽的获得 | 第58-59页 |
| 2．3 讨论 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 缩写词 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附图 | 第67-71页 |
