| 摘要（中文） | 第1-12页 |
| 摘要（英文） | 第12-14页 |
| 1． 藻红蛋白的研究背景、问题与思考 | 第14-32页 |
| 1．1 藻红蛋白的基本性质 | 第15-21页 |
| 1．1．1 藻红蛋白的分类与命名 | 第15-16页 |
| 1．1．2 藻红蛋白的分子组成 | 第16-17页 |
| 1．1．3 藻红蛋白的聚集态形式 | 第17-18页 |
| 1．1．4 藻红蛋白的光谱学特性 | 第18-19页 |
| 1．1．5 藻红蛋白理化特性和超微结构 | 第19-20页 |
| 1．1．6 藻红蛋白的空间结构 | 第20-21页 |
| 1．2 藻红蛋白的分离纯化以及纯度、浓度测定和表示方法 | 第21-23页 |
| 1．3 藻红蛋白在藻体生理过程中的作用 | 第23-25页 |
| 1．3．1 藻红蛋白在藻体细胞内可以作为储存蛋白 | 第23页 |
| 1．3．2 藻类的光合捕光色素系统及藻红蛋白在其中的作用 | 第23-25页 |
| 1．4 藻红蛋白的分子生物学及其在光合生物进化中的作用 | 第25-26页 |
| 1．5 藻红蛋白的应用 | 第26-30页 |
| 1．5．1 藻红蛋白在医药中的应用 | 第26-28页 |
| 1．5．2 藻红蛋白与荧光免疫分析 | 第28-30页 |
| 1．5．2．1 藻红蛋白荧光探针的研制 | 第28-30页 |
| 1．5．2．2 藻红蛋白荧光探针的应用 | 第30页 |
| 1．6 存在的问题及本项目研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2． 珊瑚藻R-藻红蛋白分离纯化及理化特性研究 | 第32-57页 |
| 2．1 材料 | 第32-33页 |
| 2．1．1 供试海藻样品的采集、鉴定与保存 | 第32页 |
| 2．1．2 实验动物 | 第32页 |
| 2．1．3 离子交换和凝胶过滤介质 | 第32页 |
| 2．1．4 药品和试剂 | 第32-33页 |
| 2．1．5 供试主要仪器 | 第33页 |
| 2．2 方法 | 第33-39页 |
| 2．2．1 藻红蛋白的粗提和盐析 | 第33页 |
| 2．2．1．1 藻红蛋白的粗提和可见光光谱扫描分析 | 第33页 |
| 2．2．1．2 藻红蛋白粗提物的盐析 | 第33页 |
| 2．2．2 珊瑚藻藻红蛋白的柱色谱层析分离纯化 | 第33-35页 |
| 2．2．2．1 DEAE-Sepharose FF柱层析 | 第33-34页 |
| 2．2．2．2 羟基磷灰石（HA）柱制备和柱层析 | 第34-35页 |
| 2．2．2．2．1 羟基磷灰石（HA）的制备 | 第34页 |
| 2．2．2．2．2 Test tube法确定HA操作初始条件及洗脱盐浓度的测定 | 第34页 |
| 2．2．2．2．3 HA柱层析 | 第34-35页 |
| 2．2．2．3 凝胶过滤层析 | 第35页 |
| 2．2．3 藻红蛋白的纯度的光学表示方法 | 第35页 |
| 2．2．4 藻红蛋白Native-PAGE纯度和分子量测定 | 第35页 |
| 2．2．4．1 藻红蛋白Native-PAGE纯度测定 | 第35页 |
| 2．2．4．2 藻红蛋白Native-PAGE线性梯度胶分子量测定 | 第35页 |
| 2．2．5 藻红蛋白亚基分子量和亚基组成 | 第35-36页 |
| 2．2．6 藻红蛋白可见光光谱特性测定 | 第36页 |
| 2．2．7 藻红蛋白荧光光谱特性测定 | 第36页 |
| 2．2．8 pH变化对藻红蛋白可见光光谱特性的影响测定 | 第36页 |
| 2．2．9 温度变化对藻红蛋白可见光光谱特性的影响测定 | 第36页 |
| 2．2．10 藻红蛋白亚基的CM-Sepharose FF柱层析分离 | 第36-37页 |
| 2．2．11 蛋白质定量（BCA法）及其摩尔消光系数测定 | 第37页 |
| 2．2．12 珊瑚藻藻红蛋白在藻体中含量 | 第37页 |
| 2．2．13 藻红蛋白抗血清制备、效价测定及其特异性评价 | 第37-39页 |
| 2．2．13．1 藻红蛋白抗血清制备与保存 | 第37-38页 |
| 2．2．13．2 藻红蛋白抗血清效价测定 | 第38页 |
| 2．2．13．2．1 琼脂双扩散法 | 第38页 |
| 2．2．13．2．2 间接ELISA法 | 第38页 |
| 2．2．13．3 藻红蛋白抗血清特异性评价 | 第38-39页 |
| 2．3 结果与分析 | 第39-54页 |
| 2．3．1 部分海藻材料鉴定结果 | 第39页 |
| 2．3．2 海藻材料的光谱学筛选 | 第39-42页 |
| 2．3．3 三种红藻的特征比较 | 第42页 |
| 2．3．4 珊瑚藻藻红蛋白的分离纯化 | 第42-43页 |
| 2．3．4．1 DEAE-Sepharose FF柱层析 | 第42-43页 |
| 2．3．4．2 HA柱层析 | 第43页 |
| 2．3．4．3 凝胶过滤层析 | 第43页 |
| 2．3．5 R-藻红蛋白的各级纯化结果 | 第43-44页 |
| 2．3．6 R-藻红蛋白纯度的PAGE鉴定 | 第44-45页 |
| 2．3．7 R-藻红蛋白的分子量测定 | 第45页 |
| 2．3．8 藻红蛋白亚基分子量和亚基组成 | 第45-46页 |
| 2．3．9 R-藻红蛋白亚基的CM-Sepharose FF柱层析分离 | 第46-49页 |
| 2．3．10 藻红蛋白可见光光谱学特性 | 第49-50页 |
| 2．3．11 藻红蛋白荧光光谱特性 | 第50-51页 |
| 2．3．12 pH对R-PE可见光谱影响 | 第51页 |
| 2．3．13 温度对R-PE可见光光谱影响 | 第51-52页 |
| 2．3．14 R-PE蛋白质浓度和摩尔消光系数的测定 | 第52页 |
| 2．3．15 R-PE抗血清效价测定及特异性评价 | 第52-53页 |
| 2．3．15．1 R-PE抗血清效价测定 | 第52-53页 |
| 2．3．15．2 R-PE抗血清特异性评价 | 第53页 |
| 2．3．16 珊瑚藻中R-PE的含量 | 第53-54页 |
| 2．4 讨论 | 第54-57页 |
| 2．4．1 关于样品海藻材料的选择 | 第54页 |
| 2．4．2 关于藻红蛋白的纯化与保存 | 第54-55页 |
| 2．4．3 关于R-PE和r-PE | 第55页 |
| 2．4．4 有待进一步开展的研究工作 | 第55-57页 |
| 3． 珊瑚藻R-藻红蛋白部分脱辅基蛋白的基因克隆和序列比较 | 第57-87页 |
| 3．1 材料 | 第58-59页 |
| 3．1．1 供试菌种与载体 | 第58页 |
| 3．1．2 引物 | 第58页 |
| 3．1．3 试剂及酶类 | 第58-59页 |
| 3．1．4 试剂盒 | 第59页 |
| 3．1．5 供试仪器 | 第59页 |
| 3．2 方法 | 第59-63页 |
| 3．2．1 珊瑚藻总DNA提取 | 第59页 |
| 3．2．2 总DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第59-60页 |
| 3．2．3 基本分子生物学方法 | 第60-61页 |
| 3．2．3．1 质粒提取 | 第60页 |
| 3．2．3．2 质粒EcoRⅠ酶切 | 第60页 |
| 3．2．3．3 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段的回收 | 第60页 |
| 3．2．3．4 质粒连接 | 第60页 |
| 3．2．3．5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| 3．2．3．6 转化 | 第61页 |
| 3．2．3．7 DNA序列测定及分析 | 第61页 |
| 3．2．4 R-PE的α和β亚基分段克隆 | 第61-63页 |
| 3．2．4．1 PCR扩增 | 第61-63页 |
| 3．2．4．2 PCR产物的克隆 | 第63页 |
| 3．2．4．3 重组克隆的酶切鉴定 | 第63页 |
| 3．2．5 珊瑚藻R-藻红蛋白γ亚基的N-端氨基酸序列测定 | 第63页 |
| 3．3 结果与分析 | 第63-85页 |
| 3．3．1 DNA的提取 | 第63-64页 |
| 3．3．2 片段P1-P2的克隆 | 第64-65页 |
| 3．3．2．1 P1-P2片段的PCR扩增 | 第64页 |
| 3．3．2．2 片段P1-P2重组质粒的筛选和鉴定 | 第64-65页 |
| 3．3．3 片段P3-P4的克隆 | 第65-66页 |
| 3．3．3．1 P3-P4片段的PCR扩增 | 第65页 |
| 3．3．3．2 片段P3-P4重组质粒的筛选和鉴定 | 第65-66页 |
| 3．3．4 片段Gsp2-P5的克隆 | 第66-67页 |
| 3．3．4．1 Gsp2-P5片段的PCR扩增 | 第66-67页 |
| 3．3．4．2 片段Gsp2-P5重组质粒的筛选和鉴定 | 第67页 |
| 3．3．5 序列分析 | 第67-82页 |
| 3．3．5．1 测序与序列分析结果 | 第67-69页 |
| 3．3．5．2 序列酶切位点分析 | 第69-70页 |
| 3．3．5．3 与已知PE基因序列比较 | 第70-82页 |
| 3．3．5．3．1 β亚基比较分析 | 第70-76页 |
| 3．3．5．3．2 α亚基序列比较分析 | 第76-82页 |
| 3．3．6 γ亚基N-端序列测定结果 | 第82-85页 |
| 3．4 结论与讨论 | 第85-87页 |
| 4． 珊瑚藻R-藻红蛋白免疫荧光探针标记 | 第87-101页 |
| 4．1 材料 | 第88-89页 |
| 4．1．1 荧光标记物与抗体 | 第88页 |
| 4．1．2 病毒分离物和病毒繁殖寄主 | 第88页 |
| 4．1．3 羊抗兔抗体及标记试剂 | 第88页 |
| 4．1．4 层析介质与其它试剂 | 第88页 |
| 4．1．5 仪器 | 第88-89页 |
| 4．2 方法 | 第89-93页 |
| 4．2．1 SPDP的试剂可用性测试方法 | 第89页 |
| 4．2．2 蛋白质与SPDP基团数测定 | 第89-90页 |
| 4．2．3 标记方法 | 第90页 |
| 4．2．3．1 R-PE的衍生 | 第90页 |
| 4．2．3．2 SAR IgG的衍生及巯醇化 | 第90页 |
| 4．2．3．3 连接反应 | 第90页 |
| 4．2．3．4 反应的终止 | 第90页 |
| 4．2．3．5 标记物混合物的层析分离 | 第90页 |
| 4．2．4 TMV的扩繁、提取、电镜观察与定量 | 第90-91页 |
| 4．2．5 R-藻红蛋白免疫荧光检测方法 | 第91-92页 |
| 4．2．5．1 间接斑点免疫法 | 第91-92页 |
| 4．2．5．2 不标记的“抗体-酶”间接斑点免疫法 | 第92页 |
| 4．2．6 检测灵敏度比较评价 | 第92-93页 |
| 4．2．6．1 间接斑点免疫法检测灵敏度测定 | 第92-93页 |
| 4．2．6．2 不标记的“抗体-酶”间接斑点免疫法检测灵敏度测定 | 第93页 |
| 4．2．6．3 间接斑点-ELISA法检测灵敏度测定 | 第93页 |
| 4．2．6．4 间接ELISA法检测灵敏度测定 | 第93页 |
| 4．3 结果分析 | 第93-97页 |
| 4．3．1 SPDP的试剂可用性测试结果 | 第93页 |
| 4．3．2 蛋白质与SPDP基团数测定 | 第93页 |
| 4．3．3 标记结果分析 | 第93-94页 |
| 4．3．4 提纯TMV的电镜观察 | 第94页 |
| 4．3．5 提纯TMV的紫外吸收曲线 | 第94-95页 |
| 4．3．6 固相支持物的选择 | 第95页 |
| 4．3．7 检测结果的观察 | 第95-96页 |
| 4．3．8 几种免疫学检测方法灵敏度比较 | 第96-97页 |
| 4．4 讨论 | 第97-101页 |
| 4．4．1 关于荧光标记 | 第97-98页 |
| 4．4．2 免疫荧光技术在可溶性抗原检测中的应用 | 第98-99页 |
| 4．4．3 关于进一步提高免疫荧光检测灵敏度的问题 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 附录1： 缩略词和英汉对照 | 第112-115页 |
| 附录2： 所用试剂和缓冲液的配制 | 第115-122页 |
