| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 英文缩写 | 第12-15页 |
| 综述 | 第15-27页 |
| 前言 | 第27-30页 |
| 实验材料 | 第30-39页 |
| 一、细菌菌株 | 第30页 |
| 二、细胞株 | 第30页 |
| 三、载体 | 第30-36页 |
| 四、酶类 | 第36页 |
| 五、细胞培养及试剂 | 第36页 |
| 六、PCR扩增及序列分析引物 | 第36-37页 |
| 七、连接子 | 第37页 |
| 八、试剂盒 | 第37页 |
| 九、仪器 | 第37-39页 |
| 实验方法 | 第39-50页 |
| 一、本研究的技术路线 | 第39-41页 |
| 二、质粒DNA的碱法小量制备 | 第41页 |
| 三、质粒DNA的大量制备 | 第41-42页 |
| 四、质粒的纯化 | 第42-43页 |
| 五、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第43-44页 |
| 六、克隆筛选 | 第44页 |
| 七、感受态细菌的制备 | 第44页 |
| 八、质粒DNA的转化 | 第44-45页 |
| 九、DNA片段的连接 | 第45页 |
| 十、质粒DNA的双链测序 | 第45页 |
| 十一、荧光素酶报告基因真核表达质粒在细胞中的瞬时表达及其酶活性的测定 | 第45-46页 |
| 十二、用磷酸钙沉淀法将重组的逆转录病毒载体导入哺乳动物细胞 | 第46-47页 |
| 十三、阳性细胞克隆的扩增 | 第47-48页 |
| 十四、病毒滴度的测定 | 第48页 |
| 十五、从感染细胞中提取基因组DNA | 第48页 |
| 十六、聚合酶链式反应(PCR) | 第48-49页 |
| 十七、MTT法测定细胞增殖及代谢能力 | 第49-50页 |
| 结果 | 第50-88页 |
| 第一部分 人甲胎蛋白(AFP)基因顺式调控元件的重新组合 | 第50-61页 |
| 一、AFP基因上游调控元件的重组策略 | 第50-51页 |
| 二、AFP基因上游序列的重排及其与荧光素酶报告基因载体的重组 | 第51-56页 |
| 1．质粒pGL-0.4p和pGL-0.2p的构建 | 第51页 |
| 2．质粒pGL-2.4p的构建 | 第51页 |
| 3．质粒pGL-1.8p的构建 | 第51页 |
| 4．质粒pGL-2.2p和pGL-3.8p的构建 | 第51-56页 |
| 三、重组质粒的酶切电泳图谱分析及核苷酸序列测定 | 第56-61页 |
| 第二部分 Luciferase报告基因真核表达质粒的转染及活性检测 | 第61-68页 |
| 第三部分 受AFP特异启动子调控的胞嘧啶脱氨酶自杀基因治疗 | 第68-88页 |
| 一、含AFP基因调控序列的胞嘧啶脱氨酶逆转录病毒载体的构建 | 第68-78页 |
| 1．逆转录病毒载体质粒pCD2-0.4E和pCD2-0.4E2的构建 | 第68页 |
| 2．质粒B-CD2及逆转录病毒载体LXCD2的构建 | 第68-69页 |
| 3．逆转录病毒载体LX1.8CD的构建 | 第69-70页 |
| 4．逆转录病毒载体LX2.2CD的构建 | 第70-78页 |
| 二、用pCD2、LX1.8CD和LX2.2CD逆转录病毒载体分别转染PA317包装细胞系 | 第78-79页 |
| 三、pCD2和LX2.2CD对三种肝癌细胞系和肺腺癌细胞系的转染及阳性克隆的获得 | 第79页 |
| 四、5FC和5FU对转染有CD基因的肝癌细胞的杀伤作用 | 第79-88页 |
| 讨论 | 第88-93页 |
| 结论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-115页 |
| 个人简历 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
