| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 引言 | 第12-15页 |
| 第一部 分重组Tim-3蛋白的克隆、表达和鉴定 | 第15-31页 |
| ·前言 | 第15-16页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·RT-PCR克隆Tim-3胞外段基因 | 第18-19页 |
| ·回收目的基因片段 | 第19-20页 |
| ·目的基因片段和载体双酶切 | 第20页 |
| ·连接反应 | 第20-21页 |
| ·转化 | 第21页 |
| ·挑取及鉴定克隆 | 第21-22页 |
| ·Tim-3蛋白的诱导表达 | 第22页 |
| ·镍柱纯化Tim-3蛋白 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE | 第22-23页 |
| ·Western Blot | 第23页 |
| ·结果 | 第23-27页 |
| ·Tim-3胞外段基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·表达载体Tim-3_pET32a(+)的构建 | 第24-25页 |
| ·Tim-3蛋白的原核表达 | 第25-26页 |
| ·Tim-3蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-31页 |
| 第二部分 炎性肠病小鼠模型的建立 | 第31-43页 |
| ·前言 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·其它 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·麻醉药的配置 | 第32-33页 |
| ·TNBS灌肠液的配置 | 第33页 |
| ·TNBS-结肠炎模型的建立 | 第33页 |
| ·体重 | 第33页 |
| ·死亡率 | 第33-34页 |
| ·病理学检查 | 第34页 |
| ·血清采集 | 第34页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离培养 | 第34-35页 |
| ·细胞因子检测 | 第35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-40页 |
| ·建模后小鼠体重变化 | 第35-36页 |
| ·建模后小鼠死亡率变化 | 第36-37页 |
| ·建模后小鼠结肠大体改变 | 第37页 |
| ·建模后小鼠结肠组织形态学改变 | 第37-38页 |
| ·建模后小鼠细胞因子的变化 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 第三部分 重组Tim-3蛋白对炎性肠病小鼠模型的作用及机制研究 | 第43-64页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·实验动物 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·细胞培养液 | 第45页 |
| ·主要实验器材 | 第45页 |
| ·其它 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·BCA蛋白定量方法 | 第45-46页 |
| ·Tim-3蛋白的处理 | 第46页 |
| ·小鼠肠系膜淋巴结细胞分离方法 | 第46页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·流式细胞术 | 第46-47页 |
| ·细胞穿孔检测细胞内因子水平 | 第47页 |
| ·Real-time PCR | 第47-48页 |
| ·小鼠脾脏CD4~+T细胞的分选 | 第48页 |
| ·其它方法(参见第二部分)。 | 第48页 |
| ·统计学分析 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-60页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白后结肠炎小鼠体重及死亡率变化 | 第49-50页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白后结肠炎小鼠结肠病理改变 | 第50-52页 |
| ·不同时间点腹腔注射Tim-3蛋白对结肠炎小鼠体重的影响 | 第52页 |
| ·建模后结肠炎小鼠体内Tim-3~+细胞的变化 | 第52-53页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白对结肠炎小鼠体内Tim-3~+细胞的影响 | 第53-54页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白对结肠炎小鼠脾脏CD4~+细胞Tim-3基因水平的影响 | 第54-55页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白诱导Th1、Th17偏移和TGF-β水平下调 | 第55-57页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白对结肠炎小鼠体内CD4~+Foxp3~+T细胞的影响 | 第57-59页 |
| ·腹腔注射Tim-3蛋白对结肠炎小鼠体内共刺激分子的影响 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 文献综述 | 第70-77页 |
| 参考文献 | 第74-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第81页 |
