| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一部分 TRPV1 在皮肤角质形成细胞中表达与功能 | 第17-28页 |
| 实验材料、试剂和仪器 | 第17-19页 |
| 1. 实验材料 | 第17-18页 |
| 2. 试剂及其配制 | 第18页 |
| 3. 仪器 | 第18-19页 |
| 实验方法 | 第19-23页 |
| 1. 人皮肤角质形成细胞分离培养 | 第19页 |
| 2. HaCaT细胞培养 | 第19-20页 |
| 3. RT-PCR法检测TRPV1 mRNA表达 | 第20-21页 |
| 4. 流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度 | 第21-22页 |
| 5. ELISA方法检测致炎因子分泌 | 第22-23页 |
| 6. 统计学处理 | 第23页 |
| 实验结果 | 第23-28页 |
| 1. CAP 对NHK细胞和HaCaT细胞TRPV1 mRNA表达的影响 | 第23-24页 |
| 2. CAP升高HaCaT细胞内钙离子浓度 | 第24-25页 |
| 3. CPZ降低CAP诱导的HaCaT细胞内钙离子浓度升高 | 第25-26页 |
| 4. CAP对人角质形成细胞中IL-8 和PGE2 分泌的影响 | 第26页 |
| 5. CPZ降低CAP 诱导升高的炎症介质水平 | 第26-28页 |
| 第二部分 TRPV1 受体活化后信号通路研究 | 第28-50页 |
| 实验材料、试剂和仪器 | 第28-32页 |
| 1. 实验材料 | 第28页 |
| 2. 试剂及其配制 | 第28-31页 |
| 3. 主要仪器 | 第31-32页 |
| 实验方法 | 第32-37页 |
| 1. 构建稳定表达TRPV1 的HEK 293T细胞株 | 第32-34页 |
| 2. 激光共聚焦显微镜观察转染细胞 | 第34页 |
| 3. 流式细胞仪鉴定稳定表达TRPV1 的HEK 293T细胞 | 第34页 |
| 4. Western blot检测HEK 293T-TRPV1 细胞表达TRPV1 | 第34-35页 |
| 5. HEK 293T-TRPV1 细胞经CAP 刺激后细胞内钙离子检测 | 第35-36页 |
| 6. 双荧光素酶转染检测TRPV1 介导的NFkB活化 | 第36-37页 |
| 7. 信号通路抑制剂对NFkB转录活性的影响 | 第37页 |
| 8. 统计学处理 | 第37页 |
| 实验结果 | 第37-50页 |
| 1. 稳定表达TRPV1 的HEK 293T细胞株的建立与筛选 | 第37-44页 |
| 2. 流式细胞检测仪鉴定稳定表达TRPV1 的细胞株 | 第44页 |
| 3. Western blot法鉴定稳定转染细胞株TRPV1 蛋白表达 | 第44-45页 |
| 4. 细胞钙离子浓度升高与CAP呈浓度依赖性 | 第45-46页 |
| 5. 拮抗剂CPZ降低CAP诱导的细胞内钙离子浓度 | 第46页 |
| 6. 胞内钙离子浓度升高依赖于细胞外钙离子的存在 | 第46-47页 |
| 7. TRPV1 活化能够促进激活NFκB | 第47-49页 |
| 8. 信号通路抑制剂对NFκB转录活性的影响 | 第49-50页 |
| 第三部分 药物对TRPV1 介导炎症介质表达的干预 | 第50-61页 |
| 实验材料、试剂和仪器 | 第50-52页 |
| 一、实验材料 | 第50页 |
| 二、试剂及其配制 | 第50-52页 |
| 三、仪器 | 第52页 |
| 实验方法 | 第52-54页 |
| 1. 药物对CAP 诱导细胞表达TRPV1 mRNA的干预作用 | 第52页 |
| 2. 药物对CAP 诱导细胞内钙离子浓度的干预 | 第52-53页 |
| 3. 药物对TRPV1 介导的NFkB活化的干预作用 | 第53页 |
| 4. 药物对HaCaT细胞中致炎因子分泌的影响 | 第53页 |
| 5. 统计学处理 | 第53-54页 |
| 实验结果 | 第54-61页 |
| 1. 药物干预NHK细胞和HaCaT细胞中TRPV1 mRNA表达 | 第54-55页 |
| 2. 药物干预CAP 诱导细胞钙离子内流 | 第55-57页 |
| 3. 药物干预TRPV1 介导的NFκB活化 | 第57页 |
| 4. 药物干预CAP诱导HaCaT细胞分泌致炎因子 | 第57-61页 |
| 第四部分 TRPV1 激活后的细胞蛋白质组学研究 | 第61-78页 |
| 实验材料、试剂和仪器设备 | 第61-65页 |
| 一、细胞 | 第61页 |
| 二、药品 | 第61页 |
| 三、试剂及其配制 | 第61-65页 |
| 实验方法 | 第65-70页 |
| 1. 细胞样品 | 第65-66页 |
| 2. 双向电泳实验 | 第66-68页 |
| 3. 图像扫描与分析 | 第68页 |
| 4. MALDI-TOF-MS鉴定差异蛋白质 | 第68-70页 |
| 实验结果 | 第70-78页 |
| 1. 双向凝胶电泳分析CAP刺激后HaCaT蛋白表达谱的改变 | 第70页 |
| 2. 双向凝胶电泳图像匹配分析 | 第70-72页 |
| 3. 蛋白质点位置重复性的计算 | 第72页 |
| 4. 双向凝胶电泳图像差异分析 | 第72-74页 |
| 5. MALDI-TOF-MS鉴定部分差异蛋白 | 第74-78页 |
| 讨论 | 第78-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 综述：TRPV1 受体拮抗剂研究进展 | 第91-107页 |
| 参考文献 | 第102-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 博士期间工作 | 第108页 |
