| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第6-10页 |
| 一 绪言 | 第10-22页 |
| 1 氨酰-tRNA合成酶的研究 | 第10-16页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶的结构 | 第10-11页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶的功能 | 第11-14页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶的起源 | 第14-15页 |
| ·氨酰-tRNA合成酶的克隆、表达与纯化研究 | 第15-16页 |
| 2 色氨酰-tRNA合成酶的研究 | 第16-18页 |
| ·原核色氨酰-tRNA合成酶的研究 | 第16-17页 |
| ·真核色氨酰-tRNA合成酶的研究 | 第17页 |
| ·线粒体氨酰-tRNA合成酶的研究 | 第17-18页 |
| 3 研究的背景、目的意义、研究内容和技术路线 | 第18-22页 |
| ·研究的背景 | 第18-20页 |
| ·本研究的项目依托与研究的意义 | 第20-21页 |
| ·主要研究内容 | 第21页 |
| ·主要技术路线 | 第21-22页 |
| 二 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达载体的构建 | 第22-31页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| ·药品与试剂 | 第22-23页 |
| ·材料与试剂 | 第22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·常用试剂配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的基因片断的制备 | 第23-25页 |
| ·pMD18-hmtTrpRS克隆载体的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| ·pET-24a(+)-hmtTrpRS表达载体的构建与鉴定 | 第26-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-30页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的基因的获得 | 第28-30页 |
| ·人的乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)总RNA的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR扩增人线粒体色氨酰-tRNA合成酶片段 | 第28页 |
| ·pMD18-hmtTrpRS克隆载体的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·pET-24a(+)-hmtTrpRS表达载体的构建与鉴定 | 第28-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| ·采取亚克隆的策略构建融合表达载体pET-24a(+)-hmtTrpRS | 第30页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的原核表达系统 | 第30-31页 |
| 三 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达与纯化 | 第31-42页 |
| 1 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·药品与试剂 | 第31-32页 |
| ·材料与试剂 | 第31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31页 |
| ·常用试剂配制 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达 | 第32-33页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化 | 第33-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的表达 | 第35-37页 |
| ·IPTG浓度对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 | 第35-36页 |
| ·诱导时间对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 | 第36页 |
| ·诱导温度对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 | 第36-37页 |
| ·培养基对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因表达的影响 | 第37页 |
| ·人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化鉴定 | 第37-40页 |
| ·包涵体的纯化 | 第38-39页 |
| ·可溶蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| ·诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响 | 第40页 |
| ·包涵体的形成 | 第40-41页 |
| ·金属螯合亲和层析对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的纯化 | 第41-42页 |
| 四 人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的氨酰化活力测定 | 第42-51页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·药品与试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·人线粒体tRNATrp的制备 | 第42-44页 |
| ·氨酰化反应测定人线粒体色氨酰-tRNA合成酶动力学常数 | 第44-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·人线粒体tRNATrp的制备 | 第46-47页 |
| ·两步PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·人线粒体tRNATrp的酶切体外转录 | 第47页 |
| ·氨酰化反应测定人线粒体色氨酰-tRNA合成酶动力学常数 | 第47-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 五 结论 | 第51-53页 |
| 六 展望 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录A | 第63-64页 |
| 附录B | 第64-66页 |
| 附录C | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
