| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-29页 |
| ·乙烯在植物生长发育过程中的重要作用 | 第15-19页 |
| ·乙烯与植物的生长 | 第15-16页 |
| ·乙烯与生物或非生物胁迫 | 第16-17页 |
| ·乙烯与植物的抗病性 | 第17-19页 |
| ·依赖乙烯的 SAR | 第18页 |
| ·依赖乙烯的 ISR | 第18-19页 |
| ·乙烯合成途径中关键酶研究进展 | 第19-28页 |
| ·乙烯的生物合成途径 | 第19页 |
| ·ACC 合成酶是多基因家族 | 第19-20页 |
| ·ACC 合成酶的分子克隆 | 第20-22页 |
| ·ACC 合成酶的结构特点 | 第22-24页 |
| ·ACC 合成酶的表达调控 | 第24-27页 |
| ·植物 ACS 基因表达的诱导因子 | 第24-25页 |
| ·环境胁迫的诱导 | 第25页 |
| ·不同发育阶段的诱导 | 第25-26页 |
| ·同种植物不同 ACS 基因器官表达的特异性差异 | 第26页 |
| ·植物不同 ACS 基因时空表达的特异性差异 | 第26-27页 |
| ·植物不同 ACS 基因转录水平上的表达差异 | 第27页 |
| ·ACC 合成酶启动子研究进展 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-54页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·植物材料培养与处理 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29-30页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第30页 |
| ·PCR 引物 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-54页 |
| ·RNA 提取 | 第31-32页 |
| ·利用RNeasy Plant Mini Kit 提取总 RNA | 第31-32页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取 RNA | 第32页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第32-33页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第33页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第33-34页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第34-37页 |
| ·简并引物 PCR 获得 GhACS1 中间片段 | 第34页 |
| ·5′RACE获得5′端序列 | 第34-35页 |
| ·3′RACE获得3′端序列 | 第35-36页 |
| ·cDNA全长序列的获得 | 第36-37页 |
| ·GhACS1 全长基因组序列的获得 | 第37页 |
| ·目的片段的回收 | 第37-38页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第38-39页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第39-42页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA | 第39页 |
| ·大量提取质粒 DNA | 第39-41页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第41-42页 |
| ·对重组质粒的鉴定 | 第42页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·对重组质粒的菌液 PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·半定量 RT-PCR 检测目的基因的表达 | 第42-43页 |
| ·Northern 杂交 | 第43-45页 |
| ·RNA 提取 | 第43页 |
| ·琼脂糖甲醛变性胶电泳 | 第43-44页 |
| ·转膜及烘膜 | 第44页 |
| ·探针合成 | 第44-45页 |
| ·预杂交及杂交 | 第45页 |
| ·Southern 杂交 | 第45-46页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第46页 |
| ·转膜 | 第46页 |
| ·探针合成 | 第46页 |
| ·预杂交及杂交 | 第46页 |
| ·启动子的克隆 | 第46-48页 |
| ·DNA 的限制酶酶切反应 | 第46-47页 |
| ·连接反应 | 第47页 |
| ·PCR 扩增 | 第47-48页 |
| ·植物表达载体的构建与转化 | 第48-51页 |
| ·植物正义表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第50-51页 |
| ·原核表达 | 第51-54页 |
| ·试剂配制 | 第51页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第51页 |
| ·大肠杆菌BL21 原核表达的诱导 | 第51-52页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第52-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-76页 |
| ·棉花ACC 合成酶基因的分离 | 第54-58页 |
| ·棉花RNA 的提取及反转录 | 第54页 |
| ·棉花GhACS1 中间片段的克隆与测序 | 第54-55页 |
| ·GhACS1 5′片段的分离 | 第55页 |
| ·GhACS1 3′片段的分离 | 第55-56页 |
| ·GhACS1 全长cDNA 的分离 | 第56-58页 |
| ·GhACS1 的序列分析 | 第58-65页 |
| ·GhACS1 的全长cDNA 分析 | 第58-60页 |
| ·GhACS1 编码蛋白序列分析 | 第60-61页 |
| ·GhACS1 基因组序列分析 | 第61-65页 |
| ·GhACS1 在棉花基因组中的拷贝数分析 | 第65-66页 |
| ·GhACS1 基因在外界胁迫条件下的表达特性分析 | 第66-69页 |
| ·GhACS1 基因在第一组外界胁迫下的表达特性分析 | 第66-67页 |
| ·GhACS1 基因在第二组外界胁迫下的表达特性分析 | 第67-69页 |
| ·GhACS1 基因的原核诱导表达 | 第69-71页 |
| ·GhACS1 基因的真核表达 | 第71-73页 |
| ·转基因烟草表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第72-73页 |
| ·再生植株的获得 | 第73页 |
| ·GhACS1 基因部分5′侧翼区的获得及响应元件的鉴定 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| ·GhACS1 基因序列特征分析 | 第76页 |
| ·GhACS1 在外界胁迫条件下的诱导表达分析 | 第76-78页 |
| ·GhACS1 的原核表达 | 第78页 |
| ·GhACS1 基因启动子的克隆 | 第78-80页 |
| 小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 附: 硕士阶段已发表论文 | 第97页 |
