| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·固氮基因表达调控机制的研究进展 | 第11-19页 |
| ·固氮酶的结构与成分 | 第11-13页 |
| ·不同固氮体系中固氮基因的组成及排布 | 第13-14页 |
| ·固氮基因的表达调控机制 | 第14-19页 |
| ·固氮正调控蛋白NifA定点突变的研究进展 | 第19-26页 |
| ·NifA蛋白的结构 | 第20-22页 |
| ·NifA蛋白对nif基因的转录激活模式 | 第22-23页 |
| ·NifA定点突变的研究现状 | 第23-26页 |
| ·斯氏假单胞菌A1501 的研究现状 | 第26-28页 |
| ·本研究的立题依据 | 第28-30页 |
| 第二章 斯氏假单胞菌A1501 NifA Ty1370 氨基酸突变对固氮基因转录的影响 | 第30-41页 |
| ·材料与方法 | 第30-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·酶、主要试剂及试剂盒 | 第30-31页 |
| ·酶切及连接反应 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备、转化 | 第31-32页 |
| ·三亲接合实验 | 第32页 |
| ·含野生型NifA及其突变体Y370C表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第33-34页 |
| ·功能互补载体及功能互补菌株的构建 | 第34页 |
| ·乙炔还原法测固氮酶活 | 第34-35页 |
| ·考马斯亮兰法测定全细胞的蛋白含量 | 第35页 |
| ·细胞生长情况的测定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·NifA蛋白关键位点的保守性分析 | 第35页 |
| ·Ty1370（根据斯氏假单胞菌A1501 编号）在NifA蛋白结构中的位置预测 | 第35-36页 |
| ·NifA-Y370C表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·共转化体系的构建β-半乳糖苷酶活性测定 | 第37-39页 |
| ·互补菌株AYP3-A1506 和AY’P3-A1506 固氮酶活及生长曲线的测定 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 固氮斯氏假单胞菌A1501“固氮岛”内新基因的功能分析 | 第41-64页 |
| ·材料与方法 | 第41-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-42页 |
| ·酶、主要试剂及试剂盒 | 第42页 |
| ·培养基与生长条件 | 第42-43页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第43页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒 | 第43-44页 |
| ·PCR反应（Polymerase Chain Reaction） | 第44-45页 |
| ·细菌RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·反转录，cDNA的合成 | 第46页 |
| ·突变株的构建 | 第46-48页 |
| ·固氮酶活及生长曲线的测定 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-62页 |
| ·突变基因重组载体的构建 | 第48-49页 |
| ·整合突变株的筛选与验证 | 第49-50页 |
| ·突变株固氮酶活的测定 | 第50页 |
| ·固氮和非固氮条件下基因表达差异 | 第50-51页 |
| ·功能互补菌株的构建 | 第51-53页 |
| ·PST1305 基因突变的分析 | 第53-55页 |
| ·PST1312 基因突变的分析 | 第55-59页 |
| ·PST1325 基因突变的分析 | 第59-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第四章 结论 | 第64-65页 |
| ·研究结果 | 第64页 |
| ·创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
