| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| 技术路线 | 第20-22页 |
| 第一章 Mipu1蛋白纯化、抗体制备、表达和亚细胞分布 | 第22-35页 |
| ·材料与方法 | 第22-29页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·主要材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·His-tagged Mipu1的粗提与纯化 | 第24-25页 |
| ·蛋白质的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25页 |
| ·质谱分析 | 第25-26页 |
| ·数据库查询 | 第26-27页 |
| ·兔抗鼠Mipu1抗血清制备 | 第27页 |
| ·间接ELISA法测定抗体滴度 | 第27页 |
| ·抗体纯化 | 第27-28页 |
| ·免疫荧光细胞化学技术观察Mipu1在细胞内的分布 | 第28页 |
| ·Western blotting | 第28-29页 |
| ·统计学处理 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·Mipu1蛋白的表达、纯化及其验证 | 第29-30页 |
| ·纯化蛋白Mipu1蛋白质谱分析 | 第30页 |
| ·抗体监测 | 第30-31页 |
| ·抗体滴度测定 | 第31页 |
| ·多克隆抗体纯化及验证 | 第31页 |
| ·Mipu1在H9c2细胞内定位 | 第31-33页 |
| ·Mipu1在大鼠各组织中的表达 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·结论 | 第34-35页 |
| 第二章 缺血-再灌注及氧化应激对心肌中Mipu1表达的影响 | 第35-50页 |
| ·材料与方法 | 第35-42页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·主要材料与试剂 | 第35-36页 |
| ·引物及寡核苷酸序列 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·大鼠心肌短暂缺血-再灌注损伤动物模型的建立 | 第37页 |
| ·细胞培养及过氧化氢(H2O2)处理 | 第37页 |
| ·组织及细胞总RNA的提取及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第38-39页 |
| ·Northern blot | 第39-40页 |
| ·原位杂交 | 第40-41页 |
| ·免疫组织化学 | 第41-42页 |
| ·统计学处理 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-48页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤动物模型的建立 | 第42页 |
| ·大鼠缺血-再灌注损伤心肌中Mipu1 mRNA的动态变化 | 第42-43页 |
| ·大鼠缺血-再灌注损伤心肌中Mipu1蛋白表达水平的动态变化 | 第43-45页 |
| ·氧化应激损伤对H9c2细胞中Mipu1表达的影响 | 第45-47页 |
| ·原位杂交显示Mipu1 mRNA在大鼠缺血心肌中的表达 | 第47-48页 |
| ·分析与讨论 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第三章 Mipu1对氧化应激所致H9c2心肌细胞凋亡的影响 | 第50-60页 |
| ·材料和方法 | 第50-53页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·主要材料和试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·细胞培养 | 第51页 |
| ·过氧化氢(H2O2)处理 | 第51页 |
| ·凋亡形态学观察及凋亡百分率计算 | 第51-52页 |
| ·Mipu1-RNAi载体构建 | 第52-53页 |
| ·脂质体转染 | 第53页 |
| ·流式细胞术 | 第53页 |
| ·Caspase-3活性定量检测 | 第53页 |
| ·统计学处理 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-58页 |
| ·Mipu1瞬时转染H9c2细胞中Mipu1蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·Mipu1过表达对H2O2所致H9c2心肌细胞凋亡的影响 | 第54-55页 |
| ·Mipu1过表达对H2O2所致H9c2心肌细胞Caspase-3活化的影响 | 第55页 |
| ·Mipu1干扰载体的构建 | 第55页 |
| ·Mipu1-RNAi对H9c2细胞内源性Mipu1 mRNA表达的影响 | 第55-56页 |
| ·Mipu1-RNAi对H9c2细胞内源性Mipu1蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| ·Mipu1-RNAi对H_2O_2所致H9c2心肌细胞凋亡的影响 | 第57页 |
| ·Mipu1-RNAi对H_2O_2所致H9c2心肌细胞Caspase-3的活化的影响 | 第57-58页 |
| ·分析与讨论 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第四章 Mipu1对凋亡相关基因Bax,Fas,Bcl-2表达的影响及其机制 | 第60-77页 |
| ·材料和方法 | 第60-67页 |
| ·材料 | 第60-62页 |
| ·主要材料和试剂 | 第60-61页 |
| ·主要仪器 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-67页 |
| ·生物信息学分析 | 第62页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第62-63页 |
| ·报告基因系统的构建 | 第63-66页 |
| ·荧光素酶活性的测定 | 第66页 |
| ·染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第66-67页 |
| ·统计学处理 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-74页 |
| ·Mipu1过表达对凋亡相关基因Bax表达的影响 | 第67-69页 |
| ·Mipu1-RNAi对凋亡相关基因Bax表达的影响 | 第69页 |
| ·染色质免疫共沉淀实验显示Mipu1蛋白能与Bax启动子结合 | 第69-70页 |
| ·Mipu1过表达对凋亡相关基因Fas表达的影响 | 第70-71页 |
| ·Mipu1-RNAi对凋亡相关基因Fas表达的影响 | 第71页 |
| ·染色质免疫共沉淀实验显示Mipu1蛋白能与Fas启动子结合 | 第71-72页 |
| ·Mipu1过表达对凋亡相关基因Bcl-2表达的影响 | 第72-73页 |
| ·Mipu1-RNAi对凋亡相关基因Bcl-2表达的影响 | 第73-74页 |
| ·ChIP实验结果显示Mipu1不能与Bcl-2启动子结合 | 第74页 |
| ·分析与讨论 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 总结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 综述Ⅰ | 第86-96页 |
| 参考文献 | 第94-96页 |
| 综述Ⅱ | 第96-102页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
