| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-33页 |
| 一、鸭病毒性肝炎防治研究进展 | 第13-15页 |
| 1. 鸭病毒性肝炎病原学 | 第13-14页 |
| 2. 鸭病毒性肝炎流行病学 | 第14页 |
| 3. 鸭病毒性肝炎临床症状及病理变化 | 第14页 |
| 4. 鸭病毒性肝炎的诊断 | 第14页 |
| 5. 鸭病毒性肝炎的防治 | 第14-15页 |
| 二、核酸疫苗研究进展 | 第15-25页 |
| 1. 核酸疫苗的历史 | 第15页 |
| 2. 核酸疫苗的组成 | 第15-16页 |
| 3. 核酸疫苗的作用及其作用机理 | 第16-19页 |
| 4. 核酸疫苗的优点及不足 | 第19-20页 |
| ·核酸疫苗的优点 | 第19-20页 |
| ·核酸疫苗的不足 | 第20页 |
| 5. 影响核酸疫苗免疫效果的因素 | 第20-23页 |
| ·目的基因的选择 | 第21页 |
| ·外源基因在机体内的高效表达 | 第21-22页 |
| ·接种前动物组织的预处理 | 第22-23页 |
| ·基因疫苗导入方法 | 第23页 |
| 6. 增强 DNA 疫苗免疫效果的策略 | 第23-25页 |
| ·CpG DNA (ODN)佐剂 | 第24页 |
| ·细胞因子佐剂 | 第24-25页 |
| 三、补体 C3d 研究进展 | 第25-31页 |
| 1 C3d 的分子结构 | 第26页 |
| 2 C3d 的分子佐剂作用 | 第26-29页 |
| 3 C3d 的可能的作用机制 | 第29-31页 |
| ·促进CR2+细胞对与C3d 偶联抗原的摄取 | 第29页 |
| ·利于抗原向次级淋巴组织的运输 | 第29-30页 |
| ·促进膜分子 B7 的表达 | 第30页 |
| ·降低 B 细胞的活化阈值 | 第30页 |
| ·利于生发中心的形成 | 第30页 |
| ·促进抗体亲和力成熟和记忆性B 淋巴细胞的形成 | 第30-31页 |
| 四、禽用基因疫苗的研究现状 | 第31页 |
| 五、本研究的目的及意义 | 第31-33页 |
| 试验一 绍兴麻鸭补体 C3d 基因的克隆及序列分析 | 第33-47页 |
| 1 材料和方法 | 第33-41页 |
| ·材料 | 第33-36页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·载体 | 第33-34页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第34页 |
| ·试验动物 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第34-35页 |
| ·RT-RCR 试验所用物品的准备和处理 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-41页 |
| ·鸭肝脏总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·RT- PCR 扩增 C3d cDNA | 第37-38页 |
| ·制作感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 的连接及转化 | 第39页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第39-40页 |
| ·测序及分析 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-45页 |
| ·RT-PCR 扩增鸭 C3dcDNA 及酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·鸭 C3d cDNA 的测序结果 | 第42-45页 |
| ·鸭C3d 基因序列 | 第42-43页 |
| ·鸭 C3d 基因序列分析 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 试验二 DHV VP1 基因的克隆及原核表达 | 第47-65页 |
| 1 材料和方法 | 第47-59页 |
| ·材料 | 第47-50页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·病毒株 | 第47页 |
| ·载体 | 第47-48页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第48页 |
| ·试验动物 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·原核表达及 Western blotting 用溶液的配制 | 第48-50页 |
| ·方法 | 第50-59页 |
| ·DHV 总 RNA 提取 | 第50页 |
| ·RT-PCR 扩增 DHV VP1 基因 cDNA | 第50-51页 |
| ·PCR 产物与 pMD18-T 的连接、转化及阳性克隆的筛选 | 第51-52页 |
| ·序列测定 | 第52页 |
| ·DHV VP1 基因与原核表达载体 pGEX-6P-1 的连接、转化及阳性克 隆的筛选 | 第52-54页 |
| ·VP1 融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达及鉴定 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第56-59页 |
| 2 结果 | 第59-63页 |
| ·RT-PCR 扩增 DHV VP1cDNA,及其 PCR、酶切鉴定 | 第59-60页 |
| ·VP1与原核表达载体pGEX-6P-1的连接 | 第60页 |
| ·VP1 基因序列的测定 | 第60-61页 |
| ·VP1 蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·VP1 融合蛋白的Western blot 分析 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 试验三 VP1-C3d-pcDNA3.1 基因疫苗的构建及免疫效果研究 | 第65-80页 |
| 1 材料和方法 | 第65-74页 |
| ·材料 | 第65-67页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·病毒株 | 第65页 |
| ·载体 | 第65-66页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第66页 |
| ·试验动物 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·ELISA 用主要溶液 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-74页 |
| ·C3d 基因与真核表达载体的连接 | 第67-69页 |
| ·DHV 基因疫苗 VP1-C3d-pcDNA3.1 的构建、转化及阳性克隆的筛选 | 第69-70页 |
| ·DHV 基因疫苗VP1-C3d- pcDNA3.1 构建流程 | 第70-72页 |
| ·VP1-C3d-pcDNA3.1 基因疫苗的大量提取 | 第72页 |
| ·试验动物的免疫接种及血清分离 | 第72-73页 |
| ·基因疫苗体液免疫效果的测定 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-78页 |
| ·C3d 基因与真核表达载体的连接 | 第74-75页 |
| ·DHV 基因疫苗 VP1-C3d-pcDNA3.1 的构建 | 第75-76页 |
| ·基因疫苗体液免疫效果的研究 | 第76-78页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第76-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简介 | 第92页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第92页 |
