中文摘要 | 第1-18页 |
英文摘要 | 第18-27页 |
符号说明 | 第27-28页 |
前言 | 第28-31页 |
第一部分 筛选能够提高神经内肽酶活性的药物 | 第31-43页 |
材料 | 第31-32页 |
方法 | 第32-33页 |
细胞的培养 | 第32页 |
MTT试验 | 第32页 |
神经内肽酶活性检测 | 第32-33页 |
统计学处理 | 第33页 |
结果 | 第33-39页 |
最佳药物浓度及作用时间的确定 | 第33-35页 |
各天然药物对神经内肽酶活性的影响 | 第35页 |
人参皂苷Rb1与Rg3对神经内肽酶活性的影响 | 第35-39页 |
讨论 | 第39-42页 |
第一部分总结 | 第42-43页 |
第二部分 表达瑞典突变型APP695的SK-N-SH细胞的制备与鉴定以及人参皂苷Rb1与人参皂苷Rg3神经保护作用的研究 | 第43-73页 |
材料 | 第43-45页 |
方法 | 第45-56页 |
瑞典突变型APP695表达载体pcDNA3.1-sweAPP695的构建 | 第45-48页 |
细胞的培养 | 第48-49页 |
细胞转染实验 | 第49页 |
Western Blot检测 | 第49-51页 |
酸联免疫吸附试验检测Aβ_(42)和Aβ_(40)分泌情况 | 第51-54页 |
流式细胞术检测细胞内氧自由基水平 | 第54页 |
流式细胞术检测细胞内钙离子水平 | 第54-55页 |
流式细胞术检测细胞凋亡 | 第55-56页 |
统计学处理 | 第56页 |
结果 | 第56-65页 |
pcDNA3.1-sweAPP695重组质粒的鉴定 | 第56-58页 |
Western Blot检测转染后sweAPP695蛋白的表达 | 第58-59页 |
ELISA检测转染后细胞外Aβ_(42)和Aβ_(40)浓度 | 第59-60页 |
sweAPP-SK细胞增殖能力变化 | 第60页 |
sweAPP-SK细胞凋亡检测及人参皂苷Rb1与Rg3对细胞凋亡的影响 | 第60-61页 |
sweAPP-SK细胞内活性氧水平检测及人参皂苷Rb1与Rg3对细胞内活性氧水平的影响 | 第61-63页 |
sweAPP-SK细胞内钙离子水平检测及人参皂苷Rb1与Rg3对细胞内钙离子水平的影响 | 第63-64页 |
人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3对凋亡相关蛋白的影响 | 第64-65页 |
讨论 | 第65-72页 |
第二部分总结 | 第72-73页 |
第三部分 人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg3升高神经内肽酶活性机制的研究 | 第73-99页 |
材料 | 第73-75页 |
方法 | 第75-90页 |
细胞的培齐 | 第75页 |
Western Blot检测 | 第75-78页 |
实时定量PCR及逆转录PCR检测 | 第78-80页 |
人nep基因转录起始点上游2.9Kb调控序列的扩增 | 第80-82页 |
·Kb启动子片段的T-载体亚克隆 | 第82-84页 |
荧光素酶报道基因载体pGL3-nep2.9Kb质粒的构建 | 第84-86页 |
荧光素酶报道基因载体pGL3-nep2.4Kb质粒的构建 | 第86-88页 |
细胞转染实验 | 第88-89页 |
双荧光素酶活性测定 | 第89-90页 |
结果 | 第90-95页 |
蛋白水平检测人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3对nep基因表达的影响 | 第90-91页 |
RNA水平检测人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3对nep基因表达的影响 | 第91页 |
荧光素酶报道基因载体-nep启动子( pGL3-nep2.9Kb)启动子质粒的鉴定 | 第91-94页 |
荧光素酶报道基因载体-nep启动子(pGL3-nep2.4Kb)启动子质粒的鉴定 | 第94页 |
人参皂Rb1与Rg3对pGL3-nep2.4Kb启动子活性影响 | 第94-95页 |
讨论 | 第95-97页 |
第三部分总结 | 第97-99页 |
附图 | 第99-109页 |
参考文献 | 第109-117页 |
致谢 | 第117-118页 |
攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第118-119页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第119-120页 |
已发表英文文章 | 第120-130页 |