| 中文摘要 | 第1-23页 |
| ABSTRACT | 第23-35页 |
| 符号说明 | 第35-37页 |
| 总体技术路线 | 第37-38页 |
| 第一章 转移性肝癌细胞模型的建立及其抵抗失巢凋亡的分子机制研究 | 第38-65页 |
| 前言 | 第38-42页 |
| 第一节 转移性肝癌细胞模型的建立及其运动力和转移力分析 | 第42-47页 |
| 材料与方法 | 第42-45页 |
| 材料 | 第42-43页 |
| 方法 | 第43-45页 |
| 1.建立抵抗失巢凋亡的转移性肝癌细胞模型 | 第43页 |
| 2.计数转移性肝癌细胞的聚集率 | 第43-44页 |
| 3.Transwell方法检测转移性肝癌细胞的侵袭力 | 第44-45页 |
| 4.Transwell检测转移性肝癌细胞的运动力 | 第45页 |
| 5.统计学分析 | 第45页 |
| 结果 | 第45-46页 |
| 1.成功构建转移性肝癌细胞模型 | 第45页 |
| 2.转移性肝癌细胞的运动力 | 第45页 |
| 3.转移性肝癌细胞的侵袭力 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-47页 |
| 第二节 转移性肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的反应及机制探讨 | 第47-60页 |
| 材料与方法 | 第47-57页 |
| 材料 | 第47-50页 |
| 方法 | 第50-57页 |
| 1.CCK-8检测TRAIL诱导转移性肝癌细胞的凋亡效应 | 第50页 |
| 2.Trypan blue检测TRAIL诱导转移性肝癌细胞的凋亡效应 | 第50页 |
| 3.TUNEL检测TRAIL诱导的凋亡效应 | 第50-51页 |
| 4.Caspase3活性检测分析TRAIL诱导的凋亡 | 第51-52页 |
| 5.转移性肝癌细胞中TRAIL及其受体的表达情况 | 第52-55页 |
| 6.Western blot检测TRAIL作用后caspase级联反应各分子的活化水平 | 第55-57页 |
| 7.统计学分析 | 第57页 |
| 结果 | 第57-59页 |
| 1.转移性肝癌细胞抵抗TRAIL诱导的凋亡具有时间依赖性和剂量依赖性 | 第57-58页 |
| 2.TUNEL和Caspase-3活性检测结果显示转移性肝癌细胞抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡 | 第58页 |
| 3.转移性肝癌细胞中TRAIL mRNA水平的表达明显高于贴壁生长细胞 | 第58页 |
| 4.转移性肝癌细胞中TRAIL蛋白表达水平存在不一致现象 | 第58页 |
| 5.转移性肝癌细胞中TRAIL受体mRNA水平和蛋白水平的表达均明显低于贴壁生长细胞 | 第58页 |
| 6.转移性肝癌细胞在TRAIL作用后Caspase级联反应各分子的活化水平明显低于贴壁生长细胞 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-60页 |
| 第三节 转移性肝癌细胞对AKT/ERK通路抑制剂的反应 | 第60-65页 |
| 材料与方法 | 第60-62页 |
| 材料 | 第60-61页 |
| 方法 | 第61-62页 |
| 1.CCK-8和trypan blue染色检测转移性肝癌细胞对AKT/ERK抑制剂的反应 | 第61页 |
| 2.Western blot检测AKT/ERK抑制后转移性肝癌细胞中AKT/ERK通路蛋白的活化水平 | 第61-62页 |
| 3.统计学分析 | 第62页 |
| 结果 | 第62页 |
| 1.转移性肝癌细胞抵抗AKT/ERK通路抑制剂的能力较贴壁细胞强 | 第62页 |
| 2.在转移性肝癌细胞AKT通路受到抑制时ERK蛋白能够被代偿性激活 | 第62页 |
| 讨论 | 第62-65页 |
| 第二章 抵抗失巢凋亡和低氧刺激的相关分子筛选及论证 | 第65-86页 |
| 前言 | 第65-67页 |
| 第一节 转移性肝癌细胞对低氧刺激的反应 | 第67-70页 |
| 材料与方法 | 第67-68页 |
| 材料 | 第67页 |
| 方法 | 第67-68页 |
| 结果 | 第68-69页 |
| 1.单个悬浮生长细胞乏氧培养24小时细胞生长状态 | 第68页 |
| 2.聚集成团的悬浮生长细胞乏氧培养24小时生长状态 | 第68-69页 |
| 讨论 | 第69-70页 |
| 第二节 抵抗失巢凋亡和低氧刺激的相关分子筛选及论证 | 第70-86页 |
| 材料与方法 | 第70-82页 |
| 材料 | 第70-71页 |
| 方法 | 第71-82页 |
| 1.分析转移性肝癌细胞表达谱芯片结果 | 第71页 |
| 2.Real-time PCR验证表达谱芯片结果中差异表达的基因 | 第71-72页 |
| 3.MicroRNA芯片结果分析 | 第72-76页 |
| 4.Real-time PCR验证microRNA芯片结果中差异表达的microRNA | 第76-77页 |
| 5.反义封闭ANGPTL4, CA9, NDRG1, TRAIL和TrkB | 第77-82页 |
| 6.统计学分析 | 第82页 |
| 结果 | 第82-83页 |
| 1.表达谱芯片中参与抵抗失巢凋亡和耐受低氧的基因 | 第82页 |
| 2.microRNA芯片结果中表达差异的与乏氧和失巢相关的microRNA有很大比例的重叠现象 | 第82页 |
| 3.表达谱芯片中差异表达基因与microRNA芯片中差异microRNA调控基因吻合良好 | 第82页 |
| 4.不同方案转染PS-asODNs的转染效率比较 | 第82页 |
| 5.PS-asODNs/ANGPTL4,PS-asODNs/CA9,PS-asODNs/NDRG1,PS-asODNs/TRAIL和PS-asODNs/TrkB的反义封闭效率 | 第82-83页 |
| 6.PS-asODNs/ANGPTL4,PS-asODNs/CA9,PS-asODNs/NDRG1,PS-asODNs/TRAIL和PS-asODNs/TrkB反义封闭后细胞的生物学活性 | 第83页 |
| 7.Real-Time PCR验证PS-asODNs/ANGPTL4的反义封闭效率 | 第83页 |
| 8.Trypan blue染色检测PS-asODNs/ANGPTL4反义封闭后细胞的死亡率 | 第83页 |
| 讨论 | 第83-86页 |
| 附图表 | 第86-111页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 博士在读期间发表论文、论著目录、成果奖励及专利申请 | 第119-122页 |
| 一.主要发表及己录用论文 | 第119-120页 |
| 二.会议交流论文 | 第120页 |
| 三.参编译著 | 第120页 |
| 四.成果鉴定及报奖 | 第120页 |
| 五.参加研究的科研项目 | 第120-121页 |
| 六.专利申请 | 第121-122页 |
| 英文部分目录 | 第122-123页 |
| 附件 | 第123-144页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第144页 |
