| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-38页 |
| 1.1 miRNA的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 miRNA的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNA的形成过程及生物学功能 | 第12-14页 |
| 1.2 乳腺的功能与基本结构 | 第14页 |
| 1.3 乳腺发育 | 第14-21页 |
| 1.3.1 胚胎期乳腺发育 | 第14-16页 |
| 1.3.2 青春期及成年期乳腺发育 | 第16-17页 |
| 1.3.3 怀孕期乳腺发育 | 第17-19页 |
| 1.3.4 退化期乳腺发育 | 第19-21页 |
| 1.4 乳腺干细胞与乳腺癌 | 第21-26页 |
| 1.4.1 乳腺干细胞 | 第21-24页 |
| 1.4.2 肿瘤干细胞与乳腺癌 | 第24-26页 |
| 1.5 参与乳腺发育及干细胞自我更新的重要信号通路 | 第26-31页 |
| 1.5.1 Wnt信号通路 | 第26-28页 |
| 1.5.2 TGF-β信号通路 | 第28-30页 |
| 1.5.3 Notch信号通路 | 第30-31页 |
| 1.6 激素与乳腺发育及乳腺癌发生 | 第31-35页 |
| 1.6.1 雌激素与乳腺发育及乳腺癌发生 | 第31-33页 |
| 1.6.2 孕激素与乳腺发育及乳腺癌发生 | 第33-34页 |
| 1.6.3 泌乳素与乳腺发育 | 第34-35页 |
| 1.6.4 生长激素与乳腺发育 | 第35页 |
| 1.7 miRNA与乳腺发育及乳腺癌发生 | 第35-37页 |
| 1.9 研究意义 | 第37-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-60页 |
| 2.1 实验动物及细胞 | 第38页 |
| 2.1.1 转基因小鼠 | 第38页 |
| 2.1.2 细胞 | 第38页 |
| 2.2 质粒及菌株 | 第38页 |
| 2.2.1 质粒 | 第38页 |
| 2.2.2 菌株 | 第38页 |
| 2.3 常规试剂及试剂盒 | 第38-40页 |
| 2.3.1 常用分子生物学试剂 | 第38页 |
| 2.3.2 细胞生物学实验相关试剂 | 第38-39页 |
| 2.3.3 免疫荧光/免疫组化实验相关试剂 | 第39页 |
| 2.3.4 Western Blot实验相关试剂 | 第39页 |
| 2.3.5 原位杂交相关试剂 | 第39-40页 |
| 2.4 常规细胞培养液及其他试剂配制 | 第40-41页 |
| 2.5 引物 | 第41页 |
| 2.6 主要仪器设备及分析软件 | 第41-42页 |
| 2.6.1 主要设备仪器 | 第41页 |
| 2.6.2 主要分析工具软件 | 第41-42页 |
| 2.7 小鼠基因组提取 | 第42页 |
| 2.8 常规PCR | 第42页 |
| 2.9 RNA提取、反转录及定量PCR | 第42-45页 |
| 2.9.1 RNA提取、反转录及定量PCR | 第42-43页 |
| 2.9.2 miRNA提取、反转录及定量PCR | 第43-45页 |
| 2.10 蛋白提取及蛋白质印迹实验(Western Blot) | 第45-46页 |
| 2.11 小鼠乳腺组织取样及组织块制备 | 第46-47页 |
| 2.12 乳腺全组织染色 | 第47-48页 |
| 2.13 H&E染色 | 第48页 |
| 2.14 免疫荧光实验 | 第48-49页 |
| 2.15 免疫组化实验 | 第49-50页 |
| 2.16 质粒提取 | 第50页 |
| 2.17 双荧光素酶报告基因载体构建及双荧光素酶检测 | 第50-53页 |
| 2.17.1 克隆目的片段 | 第50-51页 |
| 2.17.2 回收目的片段 | 第51页 |
| 2.17.3 目的片段及载体酶切及连接 | 第51-52页 |
| 2.17.4 转化及鉴定 | 第52-53页 |
| 2.17.5 突变质粒的制备 | 第53页 |
| 2.17.6 细胞的制备及转染 | 第53页 |
| 2.17.7 双荧光素酶活性检测 | 第53页 |
| 2.18 原位杂交 | 第53-54页 |
| 2.19 MaSCs流式分选 | 第54-55页 |
| 2.20 乳腺移植实验 | 第55页 |
| 2.21 小鼠卵巢切除术 | 第55-56页 |
| 2.22 乳腺上皮细胞系体外分化实验 | 第56页 |
| 2.23 X-gal染色 | 第56页 |
| 2.24 利用TOP Flash/FOP Flash质粒检测Wnt信号通路活性实验 | 第56页 |
| 2.25 CAGA报告质粒荧光素活性检测 | 第56-57页 |
| 2.26 染色质免疫沉淀检测 | 第57-60页 |
| 第三章 结果与分析 | 第60-91页 |
| 3.1 miR-31在小鼠乳腺发育过程中的表达分析 | 第60页 |
| 3.2 miR-31敲除促进小鼠乳腺发育早熟 | 第60-65页 |
| 3.3 miR-31敲除抑制小鼠乳腺细胞增殖,促进细胞分化 | 第65-69页 |
| 3.4 miR-31敲除导致泌乳小泡发育异常 | 第69-76页 |
| 3.5 miR-31敲除导致乳腺干细胞数量减少,抑制乳腺干细胞重建能力 | 第76-79页 |
| 3.6 miR-31激活Wnt信号通路并抑制TGFβ信号通路 | 第79-83页 |
| 3.7 miR-31的相关靶基因的鉴定 | 第83-85页 |
| 3.8 激素调控miR-31表达的相关分析 | 第85-91页 |
| 第四章 讨论 | 第91-93页 |
| 4.1 miR-31的表达受孕激素调节 | 第91页 |
| 4.2 miR-31介导激素对MaSCs的调控 | 第91页 |
| 4.3 miR-31抑制乳腺早熟，维持乳腺的正常功能 | 第91-92页 |
| 4.4 miR-31参与调节Wnt信号稳定 | 第92-93页 |
| 第五章 结论 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简历 | 第112页 |
