| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·羊奶脂肪酸组成及其营养价值 | 第12页 |
| ·细胞脂肪酸合成研究进展 | 第12-14页 |
| ·FAS 基因在高等植物脂肪酸合成中的作用 | 第12-13页 |
| ·动物乳腺脂肪酸合成机理 | 第13-14页 |
| ·脂肪酸合酶的研究进展 | 第14-17页 |
| ·脂肪酸合酶的生理功能 | 第14页 |
| ·脂肪酸合酶的结构 | 第14-15页 |
| ·脂肪酸合酶的RNAi 研究及其肿瘤生物学意义 | 第15-17页 |
| ·端粒酶的结构特点及与细胞永生化的关系 | 第17-20页 |
| ·端粒的结构与功能 | 第17页 |
| ·细胞的衰老、危机及永生化 | 第17-18页 |
| ·细胞永生化的方法 | 第18-20页 |
| ·siRNA 制备的研究进展 | 第20-21页 |
| ·腺病毒载体的研究进展 | 第21-23页 |
| ·腺病毒的生物学性质 | 第21-22页 |
| ·腺病毒载体的发展 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 西农萨能羊乳腺上皮细胞系的建立 | 第24-38页 |
| ·材料与方法 | 第24-30页 |
| ·样品采集 | 第24页 |
| ·试剂与药品 | 第24页 |
| ·主要仪器及设备 | 第24-25页 |
| ·细胞原代培养 | 第25-26页 |
| ·人端粒酶逆转录酶基因的转染及细胞克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·端粒酶活性的检测 | 第27-28页 |
| ·MTT 法测定细胞生长曲线 | 第28页 |
| ·细胞核型分析 | 第28-29页 |
| ·免疫细胞化学分析 | 第29页 |
| ·乳腺上皮细胞中β-酪蛋白基因表达检测 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-35页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的原代培养 | 第30-31页 |
| ·人端粒酶逆转录酶基因的转染及细胞克隆的筛选 | 第31-32页 |
| ·端粒酶活性的检测 | 第32-33页 |
| ·细胞生长曲线 | 第33页 |
| ·细胞核型分析 | 第33-34页 |
| ·免疫细胞化学分析 | 第34页 |
| ·β-酪蛋白基因的表达检测 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·乳腺上皮细胞的原代培养 | 第35-36页 |
| ·pCIneo-hTERT 质粒的转染及抗性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·MTT 法测定细胞生长曲线 | 第36-37页 |
| ·端粒酶与细胞永生化 | 第37-38页 |
| 第三章 脂肪酸合酶基因的RNA 干扰研究 | 第38-62页 |
| ·材料与方法 | 第38-49页 |
| ·试验材料 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| ·靶向FAS 基因的shRNA 干扰序列的设计及合成 | 第39页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第39-43页 |
| ·pDsRed1-C1-DH-ACP-TE 表达载体的构建 | 第43页 |
| ·有效shRNA 序列的筛选 | 第43-44页 |
| ·pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第44页 |
| ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第44-45页 |
| ·最佳MOI（Multiplicity Of Infection）的确定 | 第45页 |
| ·脂肪酸合酶基因RNA 干扰效率的检测 | 第45-48页 |
| ·FAS 基因沉默后对其他脂代谢基因的影响 | 第48页 |
| ·乳腺上皮细胞中脂肪酸的测定 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-57页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第49-50页 |
| ·pDsRed1-C1-DH-ACP-TE 载体的构建 | 第50页 |
| ·有效shRNA 序列的筛选 | 第50-51页 |
| ·pAd-shRNA 重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第52-53页 |
| ·最佳MOI（Multiplicity Of Infection）的确定 | 第53页 |
| ·脂肪酸合酶基因RNA 干扰效率的检测 | 第53-54页 |
| ·FAS 基因沉默后对其他脂肪酸代谢重要基因的影响 | 第54-55页 |
| ·乳腺上皮细胞中脂肪酸的测定 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-62页 |
| ·腺病毒载体介导的RNAi | 第57-58页 |
| ·腺病毒的包装与扩增 | 第58页 |
| ·细胞中脂肪酸的测定 | 第58-59页 |
| ·FAS 基因对乳腺上皮细胞脂肪酸合成的调控 | 第59-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
