| 缩略词表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-24页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第一部分 PML NBs 的功能蛋白质组学分析 | 第24-44页 |
| 1. 材料与仪器 | 第24-25页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| 2. 实验方法 | 第25-28页 |
| ·细胞培养、收集与照射处理 | 第25-26页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第26页 |
| ·免疫荧光检测 | 第26页 |
| ·免疫共沉淀 | 第26-27页 |
| ·蛋白质印迹（Western blot） | 第27页 |
| ·胶内酶切 | 第27页 |
| ·质谱鉴定 | 第27-28页 |
| 3. 结果与讨论 | 第28-38页 |
| ·模型建立 | 第28-30页 |
| ·免疫沉淀方法的优化 | 第30-32页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·功能蛋白分类及生物信息学分析 | 第33-36页 |
| ·质谱鉴定蛋白的分子生物学实验验证 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第二部分 PML 与NPM1 相互作用在DNA 损伤反应中的功能及调控机制研究 | 第44-86页 |
| 第一节 NPM1 在电离辐射诱发的DSBs 反应中的调控规律及功能意义研究 | 第46-57页 |
| 1. 材料与仪器 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-48页 |
| ·~(60)Co γ射线照射 | 第46-47页 |
| ·RNAi 的转染 | 第47页 |
| ·免疫荧光染色 | 第47页 |
| ·Western blot | 第47页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第47-48页 |
| ·Annexin V -FITC 细胞凋亡检测 | 第48页 |
| 3. 结果 | 第48-56页 |
| ·辐射损伤反应中MCF-7 细胞中NPM1 表达水平与细胞周期的关系 | 第48-50页 |
| ·电离辐射后不同时间点NPM1 的定位情况 | 第50-51页 |
| ·NPM1 干涉序列的确定 | 第51-53页 |
| ·敲低NPM1 表达延缓DSBs 损伤修复 | 第53-55页 |
| ·敲低NPM1 表达导致MCF-7 细胞中DNA 损伤诱发的G2 | 第55-56页 |
| ·10 Gy γ射线诱发敲低NPM1 表达的MCF-7 细胞凋亡 | 第56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 第二节 NPM1 通过负调控PML 参与细胞周期及凋亡的调控 | 第57-68页 |
| 1. 材料与仪器 | 第57页 |
| ·材料 | 第57页 |
| 2. 实验方法 | 第57-59页 |
| ·~(60)Co γ射线照射 | 第57-58页 |
| ·RNAi 的转染 | 第58页 |
| ·Western blot | 第58页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第58页 |
| ·Annexin V-FITC 细胞凋亡检测 | 第58-59页 |
| 3. 结果 | 第59-68页 |
| ·NPM1 参与细胞周期及凋亡调控的分子途径 | 第59-61页 |
| ·NPM1 通过负调控PML 参与细胞周期及凋亡的调控 | 第61-64页 |
| ·NPM1 通过调控 PML-I 剪接体参与细胞周期及凋亡的调控 | 第64-68页 |
| 小结 | 第68页 |
| 第三节 PML 蛋白与NPM1 蛋白相互作用的分子基础 | 第68-78页 |
| 1. 材料 | 第68-69页 |
| ·细胞株、菌株和质粒 | 第68-69页 |
| ·酶及抗体 | 第69页 |
| ·其它生化试剂 | 第69页 |
| ·使用PCR 引物 | 第69页 |
| 2. 实验方法 | 第69-71页 |
| ·真核细胞转染 | 第69-70页 |
| ·PML 和NPM1 的免疫荧光共定位 | 第70页 |
| ·免疫共沉淀检测PML 和NPM1 的体内相互作用 | 第70页 |
| ·NPM1 截短体PCR 扩增 | 第70页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·GST 融合蛋白的表达 | 第71页 |
| ·GST-pull down | 第71页 |
| 3. 结果 | 第71-78页 |
| ·PML 与NPM1 蛋白在MCF-7 细胞中共定位 | 第71-72页 |
| ·交互免疫共沉淀验证内源的PML 和NPM1 的体内相互作用 | 第72-73页 |
| ·GST-pull down 实验验证 PML 和 NPM1 的体外相互作用 | 第73-76页 |
| ·细胞中NPM1 对PML 表达的负调控 | 第76-77页 |
| ·NPM1 通过泛素-蛋白酶体途径调控PML 的稳定性 | 第77-78页 |
| 小结 | 第78页 |
| 讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 结论 | 第86-89页 |
| 附表 | 第89-97页 |
| 个人简历 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 蓝绿温和胶电泳系统在蛋白质复合体研究中的应用 | 第100-110页 |
| 附件 | 第110页 |
