| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 1. 前言 | 第8-15页 |
| ·转基因番茄口服疫苗研究进展 | 第8-13页 |
| ·番茄口服疫苗的优点 | 第8-9页 |
| ·番茄口服疫苗的研究进展 | 第9-12页 |
| (1) 乙肝病毒转基因番茄口服疫苗 | 第9-10页 |
| (2) 口蹄疫病毒转基因番茄口服疫苗 | 第10页 |
| (3) 霍乱毒素B亚单位转基因番茄口服疫苗 | 第10-11页 |
| (4) 其它转基因番茄口服疫苗 | 第11-12页 |
| ·番茄口服疫苗面临的问题及解决方法 | 第12页 |
| ·应用前景 | 第12-13页 |
| ·抗Ⅰ型糖尿病多肽P277及热击蛋白HSP65的研究背景 | 第13-15页 |
| 2. 材料与方法 | 第15-31页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·质粒和菌株 | 第15页 |
| ·常用试剂 | 第15-16页 |
| ·限制性内切酶 | 第15页 |
| ·培养基及常用试剂的配置 | 第15-16页 |
| (1) 植物生长调节剂及抗生素的配置 | 第15-16页 |
| (2) 细菌培养用培养基 | 第16页 |
| (3) 组织培养用培养基 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第16-24页 |
| ·构建载体所用引物 | 第16页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第16-17页 |
| ·PCR扩增HSP65、HSP65-6×P277片段 | 第17-18页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第18页 |
| ·纯化的PCR产物双酶切、割胶回收 | 第18-19页 |
| ·载体pCAMBIA2301-35s-rbc的质粒提取,酶切及胶回收 | 第19-21页 |
| (1) 活化菌株 | 第19页 |
| (2) 提取pCAMBIA2301-35s-rbc的质粒 | 第19-20页 |
| (3) 对pCAMBIA2301-35s-rbc质粒双酶切 | 第20-21页 |
| (4) 胶回收pCAMBIA2301-35s-rbc质粒进行双酶切 | 第21页 |
| ·pCAMBIA2301载体与HSP65、HSP65-6×P277酶切片段的连接和转化 | 第21-22页 |
| (1) pCAMBIA2301载体与HSP65、HSP65-6×P277酶切片段的连接 | 第21页 |
| (2) 大肠杆菌JM109感受态细胞制备(CaC12法) | 第21-22页 |
| (3) 连接产物的转化(热激法) | 第22页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277、pCAMBIA2301-HSP65的鉴定 | 第22-23页 |
| (1) 重组载体的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| (2) 重组质粒的双酶切鉴定 | 第23页 |
| ·农杆菌EHA105感受态的制备、转化和鉴定 | 第23-24页 |
| (1) 农杆菌EHA105电激感受态的制备 | 第23页 |
| (2) 农杆菌EHA105的电激转化 | 第23-24页 |
| (3) 鉴定 | 第24页 |
| ·植物表达载体对烟草的转化 | 第24-29页 |
| ·农杆菌菌液的活化 | 第24页 |
| ·叶盘化法侵染烟草 | 第24-25页 |
| (1) 侵染 | 第24-25页 |
| (2) 共培养 | 第25页 |
| (3) 筛选及分化培养 | 第25页 |
| (4) 生根培养 | 第25页 |
| (5) 移栽 | 第25页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第25-27页 |
| (1) 转基因烟草基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| (2) 转基因烟草NPT-Ⅱ基因的PCR检测 | 第26页 |
| (3) 转基因烟草目的基因的PCR检测 | 第26-27页 |
| ·转基因烟草RT-PCR检测 | 第27-29页 |
| (1) 转基因烟草RNA的提取 | 第27页 |
| (2) cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| (3) 目的基因的RT-PCR分析 | 第28-29页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65、pCAMBIA2301-HSP65-6×P277对番茄的转化 | 第29-31页 |
| ·农杆菌菌液的活化 | 第29页 |
| ·番茄子叶的遗传转化 | 第29-30页 |
| (1) 种子的消毒及播种 | 第29页 |
| (2) 外植体的预培养、侵染及共培养 | 第29-30页 |
| (3) 脱菌培养、筛选培养、壮苗及植株再生 | 第30页 |
| ·转基因番茄PCR检测 | 第30页 |
| (1) 转基因番茄基因组DNA的提取 | 第30页 |
| (2) 转基因番茄目的基因的PCR检测 | 第30页 |
| ·转基因番茄的RT-PCR检测 | 第30-31页 |
| (1) 转基因番茄RNA的提取 | 第30-31页 |
| (2) RT-PCR法检测目的基因 | 第31页 |
| 3. 结果与分析 | 第31-44页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA2301.HSP65-6×P277、pCAMBIA2301-HSP65的构建 | 第31-33页 |
| ·农杆菌的转化检测 | 第33-35页 |
| ·转基因烟草抗性苗的获得和检测 | 第35-39页 |
| ·转基因烟草抗性植株的PCR检测 | 第35页 |
| ·转基因烟草抗性植株的RT-PCR检测 | 第35-39页 |
| ·番茄抗性苗的获得和检测 | 第39-44页 |
| ·番茄抗性植株的PCR检测 | 第39页 |
| ·转基因番茄抗性植株的RT-PCR检测 | 第39-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-47页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·番茄组培过程中的突出问题及解决方法 | 第44-45页 |
| ·褐化问题 | 第44-45页 |
| ·番茄的预培养 | 第45页 |
| ·污染问题 | 第45页 |
| ·外源基因在转基因植株中的表达 | 第45-47页 |
| 5. 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士期间发表及拟发表的学术论文 | 第57-58页 |
