| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 植物蛋白激酶 | 第12-13页 |
| 1.1.1 植物蛋白激酶分类 | 第12页 |
| 1.1.2 蛋白激酶的结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 蛋白激酶在植物中的功能 | 第13页 |
| 1.1.3.1 调节生长发育 | 第13页 |
| 1.1.3.2 参与植物抗性 | 第13页 |
| 1.1.3.3 参与激素信号传导 | 第13页 |
| 1.2 植物逆境生理 | 第13-15页 |
| 1.2.1 盐胁迫对植物的伤害 | 第13-14页 |
| 1.2.1.1 生理干旱 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 离子毒害、改变膜透性 | 第14页 |
| 1.2.1.3 破坏代谢平衡 | 第14页 |
| 1.2.2 盐胁迫下植物生理变化 | 第14-15页 |
| 1.2.2.1 避盐 | 第14页 |
| 1.2.2.2 耐盐 | 第14-15页 |
| 1.2.3 叶片衰老过程 | 第15页 |
| 1.3 种子萌发 | 第15-16页 |
| 1.3.1 种子萌发过程 | 第15页 |
| 1.3.2 种子自身条件 | 第15-16页 |
| 1.3.3 环境对种子萌发的影响 | 第16页 |
| 1.3.3.1 盐胁迫影响种子萌发 | 第16页 |
| 1.3.3.2 水分影响种子萌发 | 第16页 |
| 1.3.3.3 温度、氧气和光照影响种子萌发 | 第16页 |
| 1.4 SnRK1研究进展 | 第16-20页 |
| 1.4.1 酵母、动物和植物中的蔗糖非发酵蛋白激酶 | 第16-17页 |
| 1.4.2 SnRK1调控植物代谢平衡与生长发育 | 第17-18页 |
| 1.4.3 SnRK1响应胁迫 | 第18-19页 |
| 1.4.4 SnRK1的底物及激酶活性检测 | 第19-20页 |
| 1.5 盐胁迫对毛竹的生理影响 | 第20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 毛竹PeSnRK1a基因的克隆、生物信息学分析与组织表达特性分析 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌种、载体与生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 PeSnRK1a基因信息 | 第22页 |
| 2.1.4 引物 | 第22页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 Trizol法提取毛竹各组织的总RNA | 第23页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.4 目的片段回收 | 第25页 |
| 2.2.5 目的片段与pMD19-T载体连接 | 第25页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态制备 | 第25-26页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态转化 | 第26页 |
| 2.2.8 阳性克隆鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.9 抽提质粒 | 第27页 |
| 2.2.10 双酶切反应 | 第27页 |
| 2.2.11 生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.2.13 胁迫处理毛竹实生苗 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 毛竹总RNA提取结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PeSnRK1a基因的克隆 | 第29页 |
| 2.3.3 重组质粒PCR扩增与酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 毛竹PeSnRK1a基因测序结果 | 第30页 |
| 2.3.5 毛竹PeSnRK1a基因的基本信息 | 第30-31页 |
| 2.3.6 毛竹PeSnRK1a基因的多序列对比与聚类分析 | 第31-33页 |
| 2.3.7 PeSnRK1a的组织特异表达分析及胁迫条件下的表达分析 | 第33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 PeSnRK1a蛋白的原核表达分析及酶活性检测方法建立 | 第35-47页 |
| 3.1 材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 3.1.2 化学试剂和酶 | 第35页 |
| 3.1.3 培养基与溶液配制 | 第35-36页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-41页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第36-37页 |
| 3.2.2 基因克隆 | 第37页 |
| 3.2.3 目的片段回收 | 第37页 |
| 3.2.4 连接反应 | 第37-38页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态制备 | 第38页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态转化 | 第38页 |
| 3.2.7 阳性克隆鉴定 | 第38页 |
| 3.2.8 IPTG诱导原核蛋白表达 | 第38-39页 |
| 3.2.9 植物总蛋白提取 | 第39页 |
| 3.2.10 BCA检测蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 3.2.11 Western blot | 第40-41页 |
| 3.2.12 SnRK1蛋白激酶活性检测 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 原核表达载体构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 蛋白原核表达 | 第42-43页 |
| 3.3.3 激酶活性检测 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 PeSnRK1a过表达载体的构建及转化拟南芥 | 第47-59页 |
| 4.1 材料 | 第47页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第47页 |
| 4.1.3 试剂耗材 | 第47页 |
| 4.1.4 培养基与试剂配制 | 第47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-53页 |
| 4.2.1 转基因载体构建 | 第47-50页 |
| 4.2.1.1 双酶切反应 | 第47-48页 |
| 4.2.1.2 目的片段回收 | 第48页 |
| 4.2.1.3 连接反应 | 第48-49页 |
| 4.2.1.4 大肠杆菌感受态制备 | 第49页 |
| 4.2.1.5 大肠杆菌感受态转化 | 第49-50页 |
| 4.2.1.6 大肠杆菌阳性克隆鉴定 | 第50页 |
| 4.2.2 重组载体转化农杆菌 | 第50-51页 |
| 4.2.2.1 农杆菌感受态制备 | 第50-51页 |
| 4.2.2.2 农杆菌感受态转化 | 第51页 |
| 4.2.2.3 农杆菌阳性克隆鉴定 | 第51页 |
| 4.2.3 拟南芥侵染及鉴定 | 第51-52页 |
| 4.2.3.1 拟南芥的种植 | 第51页 |
| 4.2.3.2 拟南芥侵染 | 第51-52页 |
| 4.2.3.3 植物基因组DAN提取 | 第52页 |
| 4.2.3.4 转基因植株筛选与鉴定 | 第52页 |
| 4.2.4 转基因植株生理实验 | 第52-53页 |
| 4.2.4.1 种子发芽试验 | 第52-53页 |
| 4.2.4.2 黑暗诱导叶片衰老 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 4.3.1 转基因载体的构建 | 第53页 |
| 4.3.2 转基因植株的筛选及表型分析 | 第53-55页 |
| 4.3.3 转基因植株生理实验 | 第55-57页 |
| 4.3.3.1 转基因植株离体叶片衰老检测 | 第55-56页 |
| 4.3.3.2 转基因植株种子在盐胁迫下的发芽率检测 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论和展望 | 第59-61页 |
| 5.1 结论 | 第59-60页 |
| 5.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 个人简介 | 第67页 |
| 在校论文发表情况 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
