| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 卵巢癌简介 | 第15-18页 |
| 1.1.1 卵巢癌的概况 | 第15-17页 |
| 1.1.2 卵巢癌的标准治疗方法 | 第17页 |
| 1.1.3 卵巢癌的分子靶向治疗 | 第17-18页 |
| 1.2 PRKCE与卵巢癌 | 第18-23页 |
| 1.2.1 PKC家族 | 第18-20页 |
| 1.2.2 PRKCE | 第20-23页 |
| 1.2.3 PRKCE与卵巢癌 | 第23页 |
| 1.3 本课题的研究内容及意义 | 第23-26页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第23-24页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 PRKCE基因与卵巢癌肿瘤的相关性研究 | 第26-43页 |
| 2.1 实验仪器、材料与试剂 | 第26-29页 |
| 2.1.1 仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第27-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 溶液的配制 | 第29-33页 |
| 2.2.2 Westernblot实验 | 第33-35页 |
| 2.2.3 免疫组织化学(IHC)实验 | 第35-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-41页 |
| 2.3.1 卵巢癌样本数据分析 | 第37-40页 |
| 2.3.2 PRKCE基因编码的蛋白PKCε在浆液性卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中过量表达 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第41-43页 |
| 第三章 敲减PRKCE基因对卵巢癌细胞株的影响 | 第43-66页 |
| 3.1 实验仪器、材料与试剂 | 第43-45页 |
| 3.1.1 仪器 | 第43页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第43-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 溶液的配制 | 第45页 |
| 3.2.2 Westernblot实验 | 第45页 |
| 3.2.3 siRNA序列的设计与合成 | 第45-46页 |
| 3.2.4 细胞siRNA逆转染实验 | 第46页 |
| 3.2.5 qRT-PCR实验 | 第46-48页 |
| 3.2.6 细胞增殖实验 | 第48-49页 |
| 3.2.7 细胞划痕实验 | 第49页 |
| 3.2.8 Transwell检测细胞迁移和侵润实验 | 第49-50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-64页 |
| 3.3.1 在卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中用siRNA敲减PRKCE基因 | 第50-53页 |
| 3.3.2 敲减PRKCE对卵巢癌细胞株A2780和SKOV3增殖的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.3 敲减PRKCE对卵巢癌细胞迁移和侵润的影响 | 第54-61页 |
| 3.3.4 敲减PRKCE基因能够引起下游信号通路的信号传导,调控迁移侵润相关蛋白的表达 | 第61-64页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第64-66页 |
| 第四章 过表达PRKCE基因对卵巢癌细胞株的影响 | 第66-85页 |
| 4.1 实验仪器、材料与试剂 | 第66-68页 |
| 4.1.1 仪器 | 第66页 |
| 4.1.2 材料与试剂 | 第66-68页 |
| 4.2 方法 | 第68-75页 |
| 4.2.1 溶液的配制 | 第68-69页 |
| 4.2.2 Westernblot实验 | 第69页 |
| 4.2.3 qRT-PCR实验 | 第69页 |
| 4.2.4 细胞增殖实验 | 第69页 |
| 4.2.5 细胞划痕实验 | 第69页 |
| 4.2.6 Transwell检测细胞迁移和侵润实验 | 第69页 |
| 4.2.7 构建过表达质粒—目的基因PRKCE的获取 | 第69-72页 |
| 4.2.8 表达载体pCDH-PRKCE-T2A-Puro的构建 | 第72-73页 |
| 4.2.9 质粒克隆鉴定 | 第73-74页 |
| 4.2.10 慢病毒制备实验 | 第74-75页 |
| 4.2.11 细胞病毒转染实验 | 第75页 |
| 4.3 实验结果 | 第75-83页 |
| 4.3.1 过表达PRKCE载体的构建 | 第75-77页 |
| 4.3.2 PRKCE基因在卵巢癌细胞株A2780和SKOV3中过表达的验证 | 第77-79页 |
| 4.3.3 过表达PRKCE对卵巢癌细胞株A2780和SKOV3增殖的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.4 过表达PRKCE对卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵润的影响 | 第80-83页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第83-85页 |
| 第五章 PRKCEshRNA的构建及体内体外验证 | 第85-104页 |
| 5.1 实验仪器、材料与试剂 | 第85-86页 |
| 5.1.1 仪器 | 第85页 |
| 5.1.2 材料与试剂 | 第85-86页 |
| 5.2 方法 | 第86-93页 |
| 5.2.1 溶液的配制 | 第86-87页 |
| 5.2.2 Westernblot实验 | 第87页 |
| 5.2.3 shRNA-PRKCE的质粒构建实验 | 第87-89页 |
| 5.2.4 慢病毒的制备实验 | 第89-90页 |
| 5.2.5 细胞病毒转染实验 | 第90页 |
| 5.2.6 细胞增殖实验 | 第90页 |
| 5.2.7 Transwell检测细胞迁移和侵润实验 | 第90页 |
| 5.2.8 免疫缺陷鼠构建卵巢癌细胞肺迁移模型实验 | 第90-91页 |
| 5.2.9 shRNA-PRKCE小鼠体内验证实验 | 第91页 |
| 5.2.10 动物组织固定脱水及石蜡包埋实验 | 第91-92页 |
| 5.2.11 动物组织石蜡切片实验 | 第92页 |
| 5.2.12 石蜡切片HE染色实验 | 第92-93页 |
| 5.2.13 免疫组织化学(IHC)实验 | 第93页 |
| 5.3 实验结果 | 第93-103页 |
| 5.3.1 shPRKCE载体的构建 | 第93-94页 |
| 5.3.2 shPRKCE在卵巢癌细胞株SKOV3中敲减PRKCE基因的效果验证 | 第94-96页 |
| 5.3.3 shPRKCE抑制卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵润的验证 | 第96-99页 |
| 5.3.4 shPRKCE敲减SKOV3细胞株中的PRKCE基因——小鼠肺转移模型体内验证实验 | 第99-103页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第103-104页 |
| 第六章 总结与展望 | 第104-106页 |
| 6.1 工作总结 | 第104-105页 |
| 6.2 工作展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第119页 |
