| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 综述 | 第17-33页 |
| 1、无损胚胎性别鉴定技术的研究意义 | 第17-18页 |
| 2、性别控制和鉴定技术的研究现状 | 第18-26页 |
| 2.1 动物性别鉴定和控制技术的研究进展 | 第18-19页 |
| 2.2 性别控制和鉴定技术的方法 | 第19-26页 |
| 3、拉曼光谱技术在生命科学领域的应用研究 | 第26-29页 |
| 3.1 拉曼光谱技术的简介 | 第26-27页 |
| 3.2 拉曼散射的原理 | 第27页 |
| 3.3 拉曼光谱仪介绍 | 第27-28页 |
| 3.4 拉曼光谱技术的应用 | 第28-29页 |
| 4、基于拉曼光谱技术无损的胚胎性别鉴定 | 第29-33页 |
| 4.1 光谱技术用于性别鉴定 | 第29-30页 |
| 4.2 光谱技术在胚胎培养代谢液分析中的应用 | 第30页 |
| 4.3 胚胎早期发育 | 第30-31页 |
| 4.4 雌、雄早期胚胎增殖分化差异 | 第31-33页 |
| 第二章 机械损伤对猪孤雌胚胎发育的影响 | 第33-50页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 1、材料和方法 | 第34-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂药品和溶液配制 | 第34-35页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2、实验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 猪卵母细胞的收集和成熟培养 | 第35-36页 |
| 2.2 卵丘细胞的分离和挑选 | 第36页 |
| 2.3 显微操作 | 第36页 |
| 2.4 卵母细胞的孤雌激活 | 第36页 |
| 2.5 孤雌胚胎的体外培养 | 第36-37页 |
| 2.6 单胚胎培养和代谢液的收集 | 第37页 |
| 2.7 囊胚总细胞数的统计 | 第37页 |
| 2.8 单胚胎培养液拉曼光谱的采集 | 第37-38页 |
| 2.9 拉曼原始数据的处理和多元分析 | 第38-39页 |
| 2.10 胚胎发育实验数据的统计和分析 | 第39页 |
| 3、试验结果 | 第39-46页 |
| 3.1 三种处理对猪孤雌胚胎发育的影响 | 第39-41页 |
| 3.2 囊胚及其代谢液的收集 | 第41页 |
| 3.3 胚胎培养液的拉曼测定 | 第41-46页 |
| 4、讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 显微注射对细胞造成的机械损伤 | 第46-47页 |
| 4.2 三组猪孤雌胚胎培养液拉曼光谱分析 | 第47页 |
| 4.3 多元统计分析—主成分分析 | 第47-48页 |
| 4.4 拉曼分析结果与胚胎发育统计结果之间的分析 | 第48页 |
| 5、小结 | 第48-50页 |
| 第三章 猪囊胚巢式PCR性别鉴定 | 第50-59页 |
| 前言 | 第50-51页 |
| 1、材料和方法 | 第51-54页 |
| 1.1 主要药品和溶液配制 | 第51页 |
| 1.2 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 1.3 引物设计和合成 | 第52页 |
| 1.4 实验方法 | 第52-54页 |
| 2、结果 | 第54-56页 |
| 2.1 基因组扩增 | 第54-55页 |
| 2.2 猪囊胚巢式PCR扩增 | 第55页 |
| 2.3 巢式PCR片段的扫描 | 第55-56页 |
| 2.4 雄性胚胎PCR产物的直接测序 | 第56页 |
| 3、讨论 | 第56-58页 |
| 4、小结 | 第58-59页 |
| 第四章 基于猪ICSI囊胚培养液拉曼光谱的无损性别鉴定方法的研究 | 第59-69页 |
| 前言 | 第59-60页 |
| 1、材料和方法 | 第60页 |
| 1.1 实验材料 | 第60页 |
| 1.2 主要试剂药品和溶液配制 | 第60页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第60页 |
| 2、实验方法 | 第60-63页 |
| 2.1 猪卵母细胞的收集和成熟培养 | 第60页 |
| 2.2 卵丘细胞的分离和挑选 | 第60页 |
| 2.3 精子的清洗 | 第60-61页 |
| 2.4 胞质内精子显微注射 | 第61页 |
| 2.5 ICSI胚胎的化学激活和培养 | 第61页 |
| 2.6 单胚胎培养和代谢液的收集 | 第61页 |
| 2.7 单胚胎培养液拉曼光谱的收集 | 第61-62页 |
| 2.8 原始数据的处理和多元分析 | 第62-63页 |
| 3、结果 | 第63-66页 |
| 3.1 胚胎代谢液和囊胚的收集 | 第63页 |
| 3.2 胚胎代谢液拉曼光谱的采集和分析 | 第63-64页 |
| 3.3 样品的分组 | 第64-65页 |
| 3.4 拉曼数据的SVM分类预测 | 第65页 |
| 3.5 测试集的预测结果 | 第65-66页 |
| 4、讨论 | 第66-67页 |
| 5、小结 | 第67-69页 |
| 第五章 基于牛IVF囊胚培养液拉曼光谱的无损性别鉴定方法的研究 | 第69-78页 |
| 前言 | 第69页 |
| 1、材料和方法 | 第69-70页 |
| 1.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 1.2 主要试剂药品和溶液配制 | 第70页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第70页 |
| 2、实验方法 | 第70-73页 |
| 2.1 发情牛血清的制备 | 第70页 |
| 2.2 牛卵泡液的制备 | 第70-71页 |
| 2.3 单层的制备 | 第71页 |
| 2.4 卵巢的准备 | 第71页 |
| 2.5 卵母细胞收集 | 第71页 |
| 2.6 卵母细胞体外成熟(IVM) | 第71-72页 |
| 2.7 牛卵母细胞的体外受精 | 第72页 |
| 2.8 胚胎体外培养 | 第72页 |
| 2.9 单胚胎培养液的收集 | 第72-73页 |
| 2.10 单胚胎培养液拉曼光谱的收集 | 第73页 |
| 2.11 牛囊胚巢式PCR性别鉴定 | 第73页 |
| 2.12 原始数据的处理和多元分析 | 第73页 |
| 3、结果 | 第73-76页 |
| 3.1 胚胎代谢液和囊胚的收集 | 第73页 |
| 3.2 黄牛囊胚PCR性别鉴定 | 第73-74页 |
| 3.3 胚胎代谢液拉曼光谱的采集和分析 | 第74-75页 |
| 3.4 样品的分组 | 第75页 |
| 3.5 拉曼数据的SVM分类和测试集的预测结果 | 第75-76页 |
| 4、讨论 | 第76-78页 |
| 5、小结 | 第78页 |
| 总结论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第109-111页 |
| 获奖情况 | 第111页 |