| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 FOXL2基因研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1 FOXL2的基因结构 | 第13-14页 |
| 1.2 FOXL2的表达与分布 | 第14页 |
| 1.3 FOXL2的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.4 FOXL2与疾病 | 第15-16页 |
| 1.4.1 FOXL2与BPES | 第15页 |
| 1.4.2 FOXL2与卵巢早衰 | 第15-16页 |
| 1.4.3 FOXL2与颗粒细胞瘤 | 第16页 |
| 2 鸡FOXL2基因研究进展 | 第16-24页 |
| 2.1 鸡性别决定机制及相关基因研究进展 | 第17-19页 |
| 2.1.1 鸡染色体与性别决定 | 第17-18页 |
| 2.1.2 鸡性激素分泌与性别决定 | 第18页 |
| 2.1.3 鸡性别反转 | 第18-19页 |
| 2.2 鸡性别决定相关的基因 | 第19-21页 |
| 2.3 鸡FOXL2基因与性别决定 | 第21-24页 |
| 引言 | 第24-26页 |
| 第二章 来航鸡FOXL2基因的克隆 | 第26-38页 |
| 1 材料 | 第26-28页 |
| 1.1 试验动物 | 第26页 |
| 1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 1.3 试剂、菌种和质粒 | 第27页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-33页 |
| 2.1 来航鸡外周血DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2 来航鸡FOXL2基因的克隆 | 第29-33页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第29页 |
| 2.2.2 来航鸡FOXL2基因的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 PCR产物的纯化与回收 | 第30页 |
| 2.2.4 目的基因与pMD-18-T载体的连接 | 第30-31页 |
| 2.2.5 连接产物的转化 | 第31页 |
| 2.2.6 质粒DNA的提取-碱裂解法 | 第31-32页 |
| 2.2.7 鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.1 来航鸡FOXL2基因的获得 | 第33页 |
| 3.2 FOXL2重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| 3.3 重组质粒的鉴定 | 第34-36页 |
| 3.3.1 PCR筛选 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组质粒酶切及测序分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 来航鸡FOXL2基因及其蛋白质的生物信息学分析 | 第38-56页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| 1.1 生物信息学分析软件及在线分析工具 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-53页 |
| 3.1 FOXL2基因系统进化分析 | 第39-40页 |
| 3.2 FOXL2的氨基酸序列分析 | 第40页 |
| 3.3 FOXL2蛋白质理化特性分析 | 第40-41页 |
| 3.4 翻译后修饰预测 | 第41-42页 |
| 3.5 二级结构预测 | 第42-44页 |
| 3.6 跨膜区及信号肽预测 | 第44-45页 |
| 3.7 保守结构域预测 | 第45-46页 |
| 3.8 亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 3.9 三级结构 | 第47页 |
| 3.10 抗原表位预测 | 第47-52页 |
| 3.11 蛋白质交联分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 小结 | 第54-56页 |
| 第四章 来航鸡FOXL2基因的原核表达及重组蛋白的鉴定 | 第56-72页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1 试验仪器和设备 | 第56-57页 |
| 1.2 试剂、菌种和质粒 | 第57页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第57-58页 |
| 2 方法 | 第58-65页 |
| 2.1 来航鸡FOXL2基因的原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第58-62页 |
| 2.1.1 引物的设计与合成 | 第58-59页 |
| 2.1.2 目的基因的PCR扩增 | 第59页 |
| 2.1.3 来航鸡FOXL2基因PCR产物与表达载体质粒pET28a(+)的酶切 | 第59-60页 |
| 2.1.4 目的基因与表达载体DNA的纯化回收 | 第60页 |
| 2.1.5 目的基因与表达载体DNA的连接和转化 | 第60-61页 |
| 2.1.6 重组表达载体的鉴定 | 第61-62页 |
| 2.2 重组pET28a-FOXL2质粒的诱导表达 | 第62-63页 |
| 2.2.1 重组菌不同时间的诱导表达 | 第62页 |
| 2.2.2 重组菌不同温度的诱导表达 | 第62页 |
| 2.2.3 重组菌不同浓度IPTG的诱导表达 | 第62-63页 |
| 2.3 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第63-64页 |
| 2.4 表达蛋白的可溶性检测 | 第64页 |
| 2.5 重组蛋白的纯化回收 | 第64-65页 |
| 2.6 重组蛋白的Western-Blot鉴定 | 第65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-70页 |
| 3.1 目的基因的获得 | 第65-66页 |
| 3.2 重组表达质粒的构建 | 第66-68页 |
| 3.3 重组表达质粒的鉴定 | 第68页 |
| 3.3.1 PCR筛选 | 第68页 |
| 3.3.2 重组质粒酶切及测序分析 | 第68页 |
| 3.4 重组蛋白诱导表达的SDS-PAGE分析 | 第68-69页 |
| 3.5 重组蛋白的Western Blot鉴定 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 5 小结 | 第71-72页 |
| 全文结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附图A 来航鸡FOXL2基因测序报告 | 第82-86页 |
| 附图B pMD18-T质粒图谱 | 第86-87页 |
| 附图C pET-28a(+)质粒图谱 | 第87-88页 |
| 附图D 氨基酸中英文对照及缩写 | 第88-89页 |
| 缩略语表 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读硕士期间发表的论文和参与专利 | 第92页 |
