| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 诱导性多能干细胞的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 诱导性多能干细胞的概况 | 第14-15页 |
| 1.1.2 诱导性多能干细胞研究的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 腺病毒简介 | 第16-18页 |
| 1.2.1 腺病毒的结构与分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 腺病毒的感染途径及衣壳蛋白的遗传修饰 | 第17-18页 |
| 1.3 噬菌体展示技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 噬菌体展示技术简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 噬菌体展示的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本课题研究意义 | 第20-21页 |
| 1.5 本课题技术路线 | 第21-22页 |
| 第2章 针对小鼠胚胎成纤维细胞MEF表面特异结合小肽的噬菌体肽库筛选及体外结合能力检测 | 第22-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 噬菌体多肽库、宿主菌以及细胞 | 第22-23页 |
| 2.1.2 材料与试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 常用溶液及其配制 | 第24-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.2.2 BRASIL方法噬菌体肽库筛选 | 第28-30页 |
| 2.2.3 单克隆的挑选及初步鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.4 特异性噬菌体的扩增和纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.5 全细胞酶联免疫反应(Whole-cell ELISA)检测 | 第33-34页 |
| 2.2.6 结合滴定实验检测 | 第34-35页 |
| 2.2.7 细胞免疫荧光检测 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-41页 |
| 2.3.1 噬菌体4轮筛选结果 | 第36页 |
| 2.3.2 单克隆的挑选及初步鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.3 单克隆测序结果分析 | 第37页 |
| 2.3.4 全细胞酶联免疫反应(Whole-cell ELISA)检测结果 | 第37-39页 |
| 2.3.5 结合滴定实验检测结果 | 第39-40页 |
| 2.3.6 细胞免疫荧光检测结果 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-44页 |
| 第3章 筛选所获得高亲和力小肽遗传修饰衣壳蛋白Hexon的腺病毒载体构建及体外感染效率检测 | 第44-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第45页 |
| 3.1.2 细胞株和菌株来源 | 第45页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第45-46页 |
| 3.1.4 常用溶液及其配制 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-54页 |
| 3.2.1 小肽GGGSMSHE、MSHE、DLWG、VDLH、VDIP的引物设计与合成 | 第47-48页 |
| 3.2.2 Hexon经外源小肽GGGSMSHE、MSHE、DLWG、VDLH、VDIP遗传修饰的腺病毒载体的构建 | 第48-51页 |
| 3.2.3 Hexon经外源小肽GGGSMSHE、MSHE、DLWG、VDLH、VDIP遗传修饰的重组腺病毒的包装 | 第51-52页 |
| 3.2.4 重组腺病毒的扩增、纯化及滴度与活力的测定 | 第52-53页 |
| 3.2.5 重组腺病毒体外感染效率的检测 | 第53页 |
| 3.2.6 重组腺病毒体外感染效率的定量检测 | 第53-54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-59页 |
| 3.3.1 Hexon经GGGSMSHE、MSHE、DLWG、VDLH、VDIP小肽插入HexonHVR5的腺病毒载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.2 Hexon经GGGSMSHE、MSHE、VDLH、VDIP小肽遗传修饰的腺病毒的制备及滴度的测定 | 第56页 |
| 3.3.3 Hexon经GGGSMSHE、MSHE、VDLH、VDIP小肽遗传修饰的腺病毒体外感染细胞效率的检测 | 第56-58页 |
| 3.3.4 重组腺病毒体外感染效率的定量检测 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-62页 |
| 第4章 携带四个iPS诱导转录因子的经外源小肽遗传修饰的腺病毒载体的构建 | 第62-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第62页 |
| 4.1.2 细胞株和菌株来源 | 第62页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第62页 |
| 4.1.4 常用溶液及其配制 | 第62-63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.2.1 携带iPS诱导转录因子的腺病毒载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.2.2 携带iPS诱导转录因子经外源小肽对衣壳蛋白Hexon遗传修饰的腺病毒载体的构建 | 第64-65页 |
| 4.2.3 携带iPS转录因子经外源小肽遗传修饰的重组腺病毒的包装 | 第65页 |
| 4.2.4 重组腺病毒的扩增、纯化及滴度与活力的测定 | 第65页 |
| 4.3 实验结果 | 第65-70页 |
| 4.3.1 携带iPS诱导转录因子的腺病毒载体的构建 | 第65-68页 |
| 4.3.2 携带iPS诱导转录因子经外源小肽对衣壳蛋白Hexon遗传修饰的腺病毒载体的构建 | 第68-70页 |
| 4.3.3 VDLH小肽修饰的腺病毒的制备及滴度的测定 | 第70页 |
| 4.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第5章 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第84页 |
