| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第12-15页 |
| 第2章 主要材料与试剂 | 第15-19页 |
| 2.1 实验用细胞株 | 第15页 |
| 2.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.3 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.4 主要试剂配制 | 第17-19页 |
| 第3章 实验方法 | 第19-24页 |
| 3.1 小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)培养 | 第19-20页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 3.1.2 细胞传代 | 第19-20页 |
| 3.2 MC3T3-E1细胞活力测定 | 第20页 |
| 3.3 Westernblot | 第20-22页 |
| 3.3.1 MC3T3-E1细胞内总蛋白的提取 | 第20页 |
| 3.3.2 蛋白浓度的测定(BCA法) | 第20-21页 |
| 3.3.3 细胞蛋白样品的预处理 | 第21页 |
| 3.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21页 |
| 3.3.5 丽春红染色 | 第21页 |
| 3.3.6 免疫反应和发光成像 | 第21-22页 |
| 3.3.7 数据分析 | 第22页 |
| 3.4 碱性磷酸酶(ALP)染色 | 第22页 |
| 3.5 茜素红染色 | 第22-23页 |
| 3.6 统计与分析 | 第23-24页 |
| 第4章 实验内容 | 第24-28页 |
| 第一部分 GSK3β/β-catenin通路介导了高糖损伤成骨细胞MC3T3-E1骨形成功能 | 第24-25页 |
| 4.1 不同浓度葡萄糖对MC3T3-E1细胞活力的影响 | 第24页 |
| 4.2 高糖对β-catenin蛋白水平的影响 | 第24-25页 |
| 4.2.1 MC3T3-E1细胞高糖量效处理 | 第24页 |
| 4.2.2 MC3T3-E1细胞高糖时效处理 | 第24-25页 |
| 4.3 高糖和LiCl对MC3T3-E1细胞的活力的影响 | 第25页 |
| 4.4 LiCl对碱性磷酸酶(ALP)的影响 | 第25页 |
| 4.5 LiCl对矿化结节的影响 | 第25页 |
| 第二部分 PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路介导雌二醇保护高糖损伤成骨细胞MC3T3-E1 | 第25-28页 |
| 4.6 雌二醇对MC3T3-E1细胞活力的影响 | 第25-26页 |
| 4.7 雌二醇对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶(ALP)的影响 | 第26页 |
| 4.8 雌二醇对MC3T3-E1矿化结节的影响 | 第26页 |
| 4.9 MC3T3-E1细胞高糖,雌二醇,LiCl处理 | 第26-27页 |
| 4.10 高糖和PI3K激动剂对β-catenin蛋白水平的影响 | 第27页 |
| 4.11 MC3T3-E1细胞高糖,雌二醇,特异性雌激素受体阻断剂处理 | 第27-28页 |
| 第5章 实验结果 | 第28-36页 |
| 第一部分GSK-3β/β-catenin通路介导高糖损伤成骨细胞MC3T3-E1 | 第28-31页 |
| 5.1 高糖降低了MC3T3-E1细胞的活力 | 第28页 |
| 5.2 高糖降低MC3T3-E1细胞中β-catenin蛋白的表达 | 第28-29页 |
| 5.2.1 高糖对MC3T3-E1细胞中β-catenin蛋白表达的量效关系 | 第28-29页 |
| 5.2.2 高糖对MC3T3-E1细胞中β-catenin蛋白表达的时效关系 | 第29页 |
| 5.3 LiCl恢复高糖损伤下MC3T3-E1细胞的活力 | 第29-30页 |
| 5.4 LiCl提高高糖损伤下MC3T3-E1细胞ALP活性 | 第30-31页 |
| 5.5 LiCl提高高糖损伤下MC3T3-E1细胞矿化结节程度 | 第31页 |
| 第二部分 PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin通路介导雌二醇保护高糖损伤成骨细胞MC3T3-E1 | 第31-36页 |
| 5.6 雌二醇恢复高糖损伤下MC3T3-E1细胞的活力 | 第31-32页 |
| 5.7 雌二醇提高高糖损伤下MC3T3-E1细胞的ALP活力 | 第32-33页 |
| 5.8 雌二醇促进高糖损伤下MC3T3-E1细胞的矿化 | 第33页 |
| 5.9 雌二醇和LiCl均可提高高糖损伤下MC3T3-E1细胞中β-catenin蛋白表达 | 第33-34页 |
| 5.10 高糖和PI3K激动剂对β-catenin蛋白水平的影响 | 第34-35页 |
| 5.11 雌二醇上调MC3T3-E1细胞中PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin通路 | 第35-36页 |
| 第6章 讨论 | 第36-40页 |
| 第7章 实验结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 综述 | 第46-51页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
