| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 第一部分 人肺炎支原体的分离培养和鉴定 | 第13-32页 |
| 1. 引言 | 第13页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第13-18页 |
| 2.1. 实验材料 | 第13-15页 |
| 2.1.1. 病料及菌种来源 | 第13-14页 |
| 2.1.2. 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3. 耗材 | 第14页 |
| 2.1.4. 主要的仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.2. 实验方法 | 第15-18页 |
| 2.2.1. 活菌计数CCU的测定 | 第15页 |
| 2.2.2. 活菌计数CFU的测定 | 第15页 |
| 2.2.3. 肺炎支原体分离株分离培养基的选择 | 第15页 |
| 2.2.3.1. 不同浓度蛋黄对肺炎支原体生长的影响 | 第15页 |
| 2.2.3.2. 不同培养基及添加物对肺炎支原体生长的影响 | 第15页 |
| 2.2.3.3. 不同浓度葡萄糖对肺炎支原体生长的影响 | 第15页 |
| 2.2.4. 肺炎支原体分离株分离培养基抗生素的选择 | 第15-16页 |
| 2.2.5. 富集培养时间的选择 | 第16页 |
| 2.2.6. 除菌方法的摸索 | 第16页 |
| 2.2.7. 肺炎支原体分离株的分离培养 | 第16页 |
| 2.2.8. L-细菌的排除 | 第16页 |
| 2.2.9. 肺炎支原体分离株的鉴定 | 第16-18页 |
| 2.2.9.1. PCR鉴定及基因分型分析 | 第16-17页 |
| 2.2.9.1.1. 16SrRNA测序 | 第16-17页 |
| 2.2.9.1.2. 常规PCR鉴定 | 第17页 |
| 2.2.9.1.3. 基因分型分析 | 第17页 |
| 2.2.9.2. 培养特性鉴定 | 第17-18页 |
| 2.2.9.2.1. 水解精氨酸实验 | 第17页 |
| 2.2.9.2.2. 葡萄糖发酵实验 | 第17-18页 |
| 2.2.9.2.3. 红细胞吸附实验 | 第18页 |
| 2.2.9.3. 血清学特性鉴定 | 第18页 |
| 2.2.9.3.1. 代谢抑制实验 | 第18页 |
| 2.2.9.3.2. 生长抑制实验 | 第18页 |
| 2.2.10. 肺炎支原体分离株的纯化 | 第18页 |
| 3. 结果 | 第18-28页 |
| 3.1. 分离培养基的选择 | 第18-21页 |
| 3.1.1. 不同浓度蛋黄对肺炎支原体生长的影响 | 第18-19页 |
| 3.1.2. 不同培养基及添加物对肺炎支原体生长的影响 | 第19-20页 |
| 3.1.3. 不同浓度葡萄糖对肺炎支原体生长的影响 | 第20-21页 |
| 3.2. 分离培养基抗生素的筛选 | 第21页 |
| 3.3. 不同除菌方法的摸索 | 第21-22页 |
| 3.4. 不同富集培养时间的分离效果 | 第22-23页 |
| 3.5. 分离株信息表 | 第23-24页 |
| 3.6. L-细菌的排除 | 第24页 |
| 3.7. 肺炎支原体分离株鉴定结果 | 第24-28页 |
| 3.7.1. 核酸及PCR鉴定 | 第24-26页 |
| 3.7.1.1. 16S rRNA测序 | 第24页 |
| 3.7.1.2. 常规PCR鉴定 | 第24-26页 |
| 3.7.1.3. 基因分型分析 | 第26页 |
| 3.7.2. 培养特性鉴定结果 | 第26-27页 |
| 3.7.3. 生化特性鉴定结果 | 第27-28页 |
| 3.7.4. 血清学特性鉴定 | 第28页 |
| 4. 讨论 | 第28-31页 |
| 5. 小结 | 第31-32页 |
| 第二部分 肺炎支原体部分分离株致病性及保护力的研究 | 第32-54页 |
| 1. 引言 | 第32页 |
| 2. 实验材料 | 第32页 |
| 2.1. 菌株来源 | 第32页 |
| 2.2. 实验动物 | 第32页 |
| 2.3. 主要试剂 | 第32页 |
| 2.4. 耗材 | 第32页 |
| 2.5. 主要的仪器设备 | 第32页 |
| 3. 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.1. 菌株及分离株的传代培养 | 第32-33页 |
| 3.2. DNA提取 | 第33页 |
| 3.3. 部分蛋白基因序列测序 | 第33-34页 |
| 3.3.1. 引物序列 | 第33-34页 |
| 3.3.2. PCR反应体系 | 第34页 |
| 3.3.3. PCR反应条件 | 第34页 |
| 3.3.4. 测序及序列比对分析 | 第34页 |
| 3.4. 动物实验 | 第34-36页 |
| 3.4.1. 致病性实验 | 第34页 |
| 3.4.2. 保护力实验 | 第34-35页 |
| 3.4.3. 肺湿重的计算 | 第35页 |
| 3.4.4. 小鼠肺组织中MP CFU计数 | 第35页 |
| 3.4.5. Balb/c小鼠肺组织病理学检测 | 第35-36页 |
| 3.4.6. 组织病理学评分 | 第36页 |
| 3.4.7. 统计学处理 | 第36页 |
| 4. 实验结果 | 第36-51页 |
| 4.1. 肺炎支原体分离株变异株序列比对结果 | 第36-41页 |
| 4.2. 肺炎支原体临床分离变异株致病性研究 | 第41-42页 |
| 4.2.1. 不同肺炎支原体临床分离变异株体重变化及湿重肺指数比较结果 | 第41-42页 |
| 4.3. 动物实验所用菌株菌落图 | 第42-51页 |
| 4.3.1. 不同肺炎支原体临床分离变异株肺组织病理学变化比较结果 | 第45-47页 |
| 4.3.2. 肺炎支原体临床分离变异株保护力研究 | 第47-51页 |
| 4.3.2.1. 湿重肺指数及小鼠肺组织中MP CFU计数比较结果 | 第47-49页 |
| 4.3.2.2. 不同肺炎支原体临床分离变异株肺组织病理学变化比较结果 | 第49-51页 |
| 5. 讨论 | 第51-53页 |
| 6. 小结 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 英文缩略语 | 第60-61页 |
| 附录Ⅰ 主要溶液及培养基的配置 | 第61-64页 |
| 附录Ⅱ MP分离株及标准菌株关于p65、cards、mpn491基因序列信息 | 第64-71页 |
| 附录Ⅲ MP分离株与标准菌株关于P65、CARDS、MPN491氨基酸信息 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 个人简历 | 第75-76页 |
