| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表(Abbreviations) | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 引言 | 第13-14页 |
| 2 猪的运输应激 | 第14-15页 |
| 3 抗氧化物质 | 第15-16页 |
| 3.1 抗氧化物质的研究现状 | 第15-16页 |
| 3.2 抗氧化防御体系 | 第16页 |
| 4 糖皮质激素与肉质 | 第16-18页 |
| 4.1 糖皮质激素 | 第16-18页 |
| 4.1.1 应激与糖皮质激素 | 第17页 |
| 4.1.2 地塞米松 | 第17-18页 |
| 4.2 糖皮质激素与肉质 | 第18页 |
| 5 糖皮质激素影响肉质的途径 | 第18-20页 |
| 5.1 糖皮质激素通过氧化应激和炎症反应影响肉质 | 第18-19页 |
| 5.2 糖皮质激素通过细胞凋亡影响肉质 | 第19-20页 |
| 6 胸腺素β10的研究综述 | 第20-21页 |
| 7 黄芪多糖 | 第21-23页 |
| 7.1 黄芪多糖的研究综述 | 第21-22页 |
| 7.2 黄芪多糖改善肉质的主要途径 | 第22-23页 |
| 7.2.1 黄芪多糖通过抗应激途径影响肉质 | 第22-23页 |
| 7.2.2 黄芪多糖通过抗凋亡途径影响肉质 | 第23页 |
| 8 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-49页 |
| 1 试验材料 | 第24-29页 |
| 1.1 试验动物和样品 | 第24页 |
| 1.2 细胞系和菌株 | 第24页 |
| 1.3 载体 | 第24-25页 |
| 1.4 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| 1.5 主要试剂与试剂盒 | 第26-27页 |
| 1.6 主要溶液的配制 | 第27-29页 |
| 1.6.1 琼脂糖凝胶电泳及检测所需溶液的配制 | 第27页 |
| 1.6.2 细胞培养所需溶液的配制 | 第27页 |
| 1.6.3 WesternBlot试剂 | 第27-28页 |
| 1.6.4 免疫荧光试剂 | 第28页 |
| 1.6.5 生物信息学网站及分析软件 | 第28-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-49页 |
| 2.1 GRα超表达载体的构建和siRNA的合成 | 第29-31页 |
| 2.1.1 GRα全长序列扩增 | 第29页 |
| 2.1.2 pCMV-HA-GRα重组载体构建 | 第29-30页 |
| 2.1.3 siRNA的合成 | 第30页 |
| 2.1.4 去内毒素质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.2 猪原代骨骼肌细胞的分离 | 第31-32页 |
| 2.2.1 组织取样 | 第31-32页 |
| 2.2.2 细胞分离 | 第32页 |
| 2.2.3 差速贴壁法纯化细胞 | 第32页 |
| 2.3 猪原代骨骼肌细胞的鉴定及培养 | 第32-39页 |
| 2.3.1 细胞的免疫荧光染色 | 第32-33页 |
| 2.3.2 细胞培养和传代 | 第33页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第33-34页 |
| 2.3.4 细胞复苏 | 第34页 |
| 2.3.5 细胞转染 | 第34页 |
| 2.3.6 RNA提取以及cDNA的合成和总蛋白提取 | 第34-36页 |
| 2.3.7 荧光定量PCR验证 | 第36-39页 |
| 2.4 Tβ10启动子预测及其双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第39-44页 |
| 2.4.1 Tβ10启动子预测 | 第39页 |
| 2.4.2 预测的启动子双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.4.3 细胞培养 | 第41-42页 |
| 2.4.4 双荧光素酶活性的检测 | 第42页 |
| 2.4.5 ChIP | 第42-44页 |
| 2.5 Tβ10超表达载体的构建 | 第44-46页 |
| 2.5.1 Tβ10全长序列扩增 | 第44页 |
| 2.5.2 pCMV-HA-Tβ10重组载体构建 | 第44-45页 |
| 2.5.3 去内毒素质粒提取 | 第45页 |
| 2.5.4 细胞培养 | 第45页 |
| 2.5.5 RNA提取以及cDNA的合成和总蛋白提取 | 第45页 |
| 2.5.6 荧光定量PCR | 第45页 |
| 2.5.7 抗原抗体免疫反应 | 第45-46页 |
| 2.6 MTT实验步骤 | 第46页 |
| 2.7 ROS检测 | 第46页 |
| 2.8 谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)酶活检测 | 第46-47页 |
| 2.9 细胞凋亡检测 | 第47-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-69页 |
| 3.1 GRα过表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.1.1 GRα全长序列扩增 | 第49页 |
| 3.1.2 pCMV-HA-GRα(pG)重组载体构建 | 第49-50页 |
| 3.2 猪PSC的分离与鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 应激模型的构建 | 第51-53页 |
| 3.3.1 DEX对猪骨骼肌细胞氧化应激的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.2 DEX对猪骨骼肌细胞增值的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.3 DEX对猪骨骼肌细胞GSH-Px的影响 | 第53页 |
| 3.4 GRα对猪原代骨骼肌细胞的影响 | 第53-59页 |
| 3.4.1 超表达和干扰GRα筛选差异表达基因 | 第53-55页 |
| 3.4.2 GRα对猪原代骨骼肌细胞氧化应激的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.3 GRα对猪原代骨骼肌细胞增殖的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.4 GRα对猪原代骨骼肌细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.5 超表达、干扰GRα对GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶活)检测 | 第58-59页 |
| 3.5 GRα与Tβ10启动子的结合 | 第59-61页 |
| 3.5.1 猪Tβ10基因启动子的研究 | 第59页 |
| 3.5.2 Tβ10启动子区域分段载体的构建及双荧光活性分析 | 第59-60页 |
| 3.5.3ChIP验证GRα细胞体内结合Tβ10 | 第60-61页 |
| 3.6 Tβ10过表达载体的构建 | 第61-64页 |
| 3.6.1 Tβ10全长序列扩增 | 第61页 |
| 3.6.2 pCMV-HA-Tβ10(pT)重组载体构建 | 第61页 |
| 3.6.3 pT对猪原代骨骼肌细胞的影响 | 第61-64页 |
| 3.7 黄芪多糖对猪原代骨骼肌细胞的作用 | 第64-69页 |
| 3.7.1 黄芪多糖对猪原代骨骼肌细胞氧化应激的影响 | 第64-65页 |
| 3.7.2 黄芪多糖对猪原代骨骼肌细胞增殖的影响 | 第65-66页 |
| 3.7.3 黄芪多糖通过GRα影响猪原代骨骼肌细胞 | 第66-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-74页 |
| 4.1 DEX与细胞凋亡 | 第70页 |
| 4.2 糖皮质激素对肉质相关基因的影响 | 第70-71页 |
| 4.3 胸腺素β10与细胞凋亡 | 第71-72页 |
| 4.4 糖皮质激素与胸腺素β10 | 第72页 |
| 4.5 黄芪多糖与肉质 | 第72-74页 |
| 结语 | 第74-76页 |
| 1 研究结论 | 第74页 |
| 2 创新性 | 第74页 |
| 3 研究的不足之处 | 第74-75页 |
| 4 下一步的工作计划 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
