| 英文缩写词表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 引物合成及测序 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株与细胞株 | 第18页 |
| 2.1.3 质粒 | 第18页 |
| 2.1.4 细胞培养及转染试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 分子生物学及化学试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.6 抗体 | 第19页 |
| 2.1.7 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.8 常用溶液配方 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第21页 |
| 2.2.2 哺乳动物细胞的转染 | 第21-22页 |
| 2.2.2.1 VigoFect真核细胞转染办法 | 第21-22页 |
| 2.2.2.2 Lipofectamine 2000试剂真核细胞转染办法 | 第22页 |
| 2.2.3 Western blot分析 | 第22-23页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀(IP) | 第23页 |
| 2.2.5 慢病毒包装及稳定克隆获得 | 第23-24页 |
| 2.2.6 激光共聚焦实验 | 第24-25页 |
| 2.2.7 转录活性检测 | 第25页 |
| 2.2.8 总RNA的提取及反转录 | 第25-26页 |
| 2.2.9 miRNA poly(A)加尾逆转录 | 第26页 |
| 2.2.10 Real-time PCR | 第26-27页 |
| 2.2.11 细胞生长分析 | 第27-28页 |
| 2.2.12 克隆形成 | 第28页 |
| 2.2.13 流式细胞术检测肿瘤干细胞 | 第28页 |
| 2.2.14 流式细胞术检测细胞生长周期 | 第28-29页 |
| 2.2.15 软琼脂实验 | 第29页 |
| 2.2.16 统计及分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-53页 |
| 3.1 GAB与ERα相互作用研究 | 第30-32页 |
| 3.1.1 GAB与ERα体内存在相互作用 | 第30页 |
| 3.1.2 GAB与ERα在细胞核中存在共定位 | 第30-31页 |
| 3.1.3 敲低、过表达GAB稳定细胞系的建立 | 第31-32页 |
| 3.2 GAB对雌激素信号通路的调节 | 第32-37页 |
| 3.2.1 GAB影响ERα的转录活性 | 第32-34页 |
| 3.2.2 GAB对雌激素信号通路下游基因蛋白水平的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.3 GAB对雌激素信号通路下游基因mRNA水平的影响 | 第35-37页 |
| 3.3 GAB的生物学功能 | 第37-40页 |
| 3.3.1 敲低GAB影响细胞生长 | 第37-38页 |
| 3.3.2 敲低GAB影响细胞克隆形成能力 | 第38-39页 |
| 3.3.3 敲低GAB影响细胞周期蛋白的表达 | 第39页 |
| 3.3.4 敲低GAB不影响乳腺癌干细胞含量 | 第39-40页 |
| 3.4 靶向GAB的miRNA的筛选 | 第40-47页 |
| 3.4.1 软件预测靶向GAB基因的miRNA | 第41-42页 |
| 3.4.2 不同细胞中miR-296-5p对GAB基因表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.3 miR-296-5p调控GAB不发生在mRNA水平 | 第43-44页 |
| 3.4.4 不同细胞系中GAB、miR-296-5p的表达 | 第44-45页 |
| 3.4.5 miR-296-5p下调GAB的5'UTR的活性 | 第45-46页 |
| 3.4.6 miR-296-5p对GAB下游基因的调控 | 第46-47页 |
| 3.5 miR-296-5p的功能研究 | 第47-53页 |
| 3.5.1 miR-296-5p对乳腺癌细胞生长的影响 | 第47-49页 |
| 3.5.2 miR-296-5p通过靶向GAB实现抑制细胞生长 | 第49-50页 |
| 3.5.3 miR-296-5p对细胞周期的影响 | 第50-51页 |
| 3.5.4 miR-296-5p影响细胞非锚着依赖性生长 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
