| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第14-22页 |
| 0.1 结直肠癌(ColorectalCancer,CRC) | 第14-15页 |
| 0.2 核心蛋白聚糖(decorin,DCN) | 第15-16页 |
| 0.3 肿瘤微环境(Tumormicroenvironment) | 第16-17页 |
| 0.4 EMT(epithelial-mesenchymaltransition,EMT) | 第17-19页 |
| 0.5 塞来昔布(Celecoxib) | 第19-20页 |
| 0.6 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第1章 建立AOM诱导DCN基因敲除型小鼠CRC模型,进行EMT发生机制研究 | 第22-39页 |
| 1.1 引言 | 第22页 |
| 1.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.2.1 动物模型、生化试剂和耗材 | 第22-24页 |
| 1.2.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 1.2.3 试剂的配制 | 第25页 |
| 1.3 实验方法及步骤 | 第25-33页 |
| 1.3.1 野生型与DCN基因敲除型小鼠结直肠癌模型的构建 | 第25页 |
| 1.3.2 野生型与DCN基因敲除型小鼠肠上皮细胞的获取 | 第25-26页 |
| 1.3.3 小鼠肠上皮细胞蛋白质的提取 | 第26页 |
| 1.3.4 BCA法蛋白质浓度的测定 | 第26-27页 |
| 1.3.5 WesternBlot | 第27-29页 |
| 1.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录 | 第29-31页 |
| 1.3.7 引物设计及RT-qPCR | 第31-32页 |
| 1.3.8 免疫组织化学(IHC) | 第32-33页 |
| 1.4 实验结果与讨论 | 第33-38页 |
| 1.4.1 在野生型和DCN基因敲除小鼠中构建AOM诱导的结直肠癌模型 | 第33-35页 |
| 1.4.2 DCN的缺失在肿瘤微环境中促进EMT的发生 | 第35-36页 |
| 1.4.3 不同造模周期中DCN的缺失促进CRC的发生与转移 | 第36-38页 |
| 1.5 结论 | 第38-39页 |
| 第2章 体内DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤作用及机制研究 | 第39-47页 |
| 2.1 引言 | 第39页 |
| 2.2 实验材料 | 第39-42页 |
| 2.2.1 动物模型、生化试剂和耗材 | 第39-41页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.2.3 试剂的配制 | 第42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-43页 |
| 2.3.1 小鼠结直肠癌模型的构建及给药处理 | 第42页 |
| 2.3.2 肠上皮细胞蛋白质的提取 | 第42-43页 |
| 2.3.3 BCA法蛋白质浓度的测定 | 第43页 |
| 2.3.4 WesternBlot | 第43页 |
| 2.3.5 免疫组织化学(IHC) | 第43页 |
| 2.3.6 肠组织RNA的提取及逆转录 | 第43页 |
| 2.3.7 引物设计及RT-qPCR | 第43页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第43-46页 |
| 2.4.1 构建AOM诱导的结直肠癌小鼠模型并进行药物处理 | 第43-44页 |
| 2.4.2 体内DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程 | 第44-46页 |
| 2.5 结论 | 第46-47页 |
| 第3章 体外DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤活性及机制研究 | 第47-59页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-49页 |
| 3.2.1 细胞株、生化试剂和耗材 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第48-49页 |
| 3.2.3 试剂的配制 | 第49页 |
| 3.3 实验方法及步骤 | 第49-53页 |
| 3.3.0 SW480和LOVO细胞培养 | 第49-51页 |
| 3.3.1 MTT法检测细胞存活率 | 第51页 |
| 3.3.2 细胞划痕实验检测细胞迁移能力 | 第51-52页 |
| 3.3.3 平板克隆形成实验检测单个细胞集落形成能力 | 第52页 |
| 3.3.4 体外培养细胞总蛋白质的提取 | 第52页 |
| 3.3.5 BCA法蛋白质浓度的测定 | 第52-53页 |
| 3.3.6 WesternBlot | 第53页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第53-58页 |
| 3.4.1 DCN与Celecoxib单独处理对结肠癌细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.2 DCN单独或与Celecoxib联合处理对结肠癌细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.3 DCN与Celecoxib联合作用后抑制结肠癌细胞迁移 | 第55页 |
| 3.4.4 DCN与Celecoxib联合作用后降低结肠癌细胞集落形成能力 | 第55-56页 |
| 3.4.5 体外DCN与Celecoxib联合作用后显著抑制EMT进程 | 第56-57页 |
| 3.4.6 DCN单独或与临床抗肿瘤药物Celecoxib联合应用的抗肿瘤可能机制 | 第57-58页 |
| 3.5 结论 | 第58-59页 |
| 第4章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第68-69页 |
