| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-41页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 精子发生 | 第12-23页 |
| 1.2.1 生殖细胞命运决定 | 第12-13页 |
| 1.2.2 原始生殖细胞迁移和存活 | 第13-14页 |
| 1.2.3 性原细胞增殖、静息和迁移 | 第14页 |
| 1.2.4 精原细胞自我更新和分化 | 第14-17页 |
| 1.2.5 精母细胞减数分裂 | 第17-20页 |
| 1.2.6 精子形成 | 第20-23页 |
| 1.3 范可尼贫血与DNA链间交联修复 | 第23-37页 |
| 1.3.1 范可尼贫血 | 第24-26页 |
| 1.3.2 DNA链间交联产生原因和结果 | 第26-27页 |
| 1.3.3 FA通路与链间交联修复 | 第27-32页 |
| 1.3.4 FA通路的其他作用 | 第32-34页 |
| 1.3.5 FA通路与其他修复机制的交互作用 | 第34-37页 |
| 1.4 FANCM的功能 | 第37-41页 |
| 1.4.1 FANCM在FA通路的功能 | 第37-38页 |
| 1.4.2 FANCM的独特作用 | 第38页 |
| 1.4.3 FANCM与Bloom综合征的关系 | 第38页 |
| 1.4.4 FANCM激活DNA损伤检验点而不依赖FA通路 | 第38-39页 |
| 1.4.5 FANCM在复制叉重塑中的作用 | 第39-41页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第41-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第41-53页 |
| 2.1.1 小鼠信息 | 第41页 |
| 2.1.2 细胞系及菌种 | 第41页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第41-42页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第42-44页 |
| 2.1.5 抗体信息 | 第44-45页 |
| 2.1.6 耗材及试剂 | 第45-50页 |
| 2.1.7 实验仪器 | 第50-52页 |
| 2.1.8 溶液配制 | 第52-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-67页 |
| 2.2.1 病例收集 | 第53-54页 |
| 2.2.2 全外显子组测序 | 第54页 |
| 2.2.3 外周血淋巴细胞培养及染色体断裂分析 | 第54页 |
| 2.2.4 质粒构建 | 第54-56页 |
| 2.2.5 细胞培养及转染 | 第56-57页 |
| 2.2.6 构建FANCM~(-/-)稳定的293T细胞系 | 第57-58页 |
| 2.2.7 外源导入FANCM回补内源FANCM敲除实验 | 第58页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第58页 |
| 2.2.9 Western Blot | 第58-59页 |
| 2.2.10 RNA抽提 | 第59-60页 |
| 2.2.11 RT-PCR | 第60页 |
| 2.2.12 基因敲除小鼠制备 | 第60-61页 |
| 2.2.13 小鼠生育力检测 | 第61页 |
| 2.2.14 睾丸组织包埋及切片 | 第61-62页 |
| 2.2.15 组织切片苏木精伊红染色(HE) | 第62页 |
| 2.2.16 组织切片免疫荧光染色 | 第62-63页 |
| 2.2.17 小鼠精母细胞铺展及染色 | 第63-64页 |
| 2.2.18 BrdU染色 | 第64页 |
| 2.2.19 TUNEL检测 | 第64页 |
| 2.2.20 精子计数 | 第64-65页 |
| 2.2.21 精原细胞中期染色体断裂分析 | 第65页 |
| 2.2.22 统计学分析 | 第65-67页 |
| 第3章 实验结果及讨论 | 第67-99页 |
| 3.1 实验结果 | 第67-97页 |
| 3.1.1 巴基斯坦近亲结婚家系中男性不育的临床表型 | 第67-68页 |
| 3.1.2 巴基斯坦家系不育患者中筛选并确定FANCM纯合移码突变 | 第68-73页 |
| 3.1.3 FANCM突变导致患者染色体断裂修复缺陷但不导致骨髓衰竭 | 第73-75页 |
| 3.1.4 FANCM突变功能缺失损害FA通路 | 第75-79页 |
| 3.1.5 FANCM突变降低细胞存活率 | 第79-80页 |
| 3.1.6 Fancm~(△~C/△~C)小鼠无骨髓衰竭 | 第80-84页 |
| 3.1.7 Fancm~(△~C/△~C)雄性小鼠生育力降低 | 第84-85页 |
| 3.1.8 Fancm~(△~C/△~C)雄性小鼠精子发生异常 | 第85-88页 |
| 3.1.9 Fancm~(△~C/△~C)雄性小鼠出生前后生殖细胞增殖减少 | 第88-92页 |
| 3.1.10 FANCM突变与精子变形阶段DNA断裂修复 | 第92-97页 |
| 3.2 讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-121页 |
| 攻读博士期间的主要学习成果 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 附录1 预测突变的有害性的软件列表 | 第125页 |
