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基于聋病特异性诱导多能干细胞研究m.1555A>G突变对线粒体功能的影响

致谢第6-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-10页
英文缩略词第11-15页
第一章 文献综述第15-30页
    前言第15-18页
    1 基因编辑第18-20页
    2 利用ZFN对iPSCs进行基因编辑第20-22页
    3 利用TALEN对iPSCs进行基因编辑第22-24页
    4 利用CRISPR/Cas对iPSCs进行基因编辑第24-26页
    5 基于iPSCs的细胞治疗第26-29页
    6 总结第29-30页
第二章 实验研究第30-62页
    1 实验材料第30-39页
        1.1 实验样品第30页
        1.2 试剂及主要仪器第30-39页
            1.2.1 实验试剂配制第30-38页
            1.2.2 试剂第38页
            1.2.3 试剂盒第38页
            1.2.4 实验仪器第38-39页
    2 实验方法第39-62页
        2.1 质粒的扩增与提取第39-40页
        2.2 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备第40-42页
        2.3 原代细胞的培养第42-44页
            2.3.1 原代细胞的采集第42页
            2.3.2 原代细胞的传代第42-43页
            2.3.3 原代细胞的冻存第43页
            2.3.4 原代细胞的复苏第43页
            2.3.5 原代细胞的收集第43-44页
        2.4 143B细胞的培养第44页
        2.5 干细胞的无饲养层培养第44-46页
            2.5.1 干细胞的传代第44-45页
            2.5.2 干细胞的冻存第45页
            2.5.3 干细胞的复苏第45页
            2.5.4 干细胞的收集第45-46页
        2.6 干细胞的饲养层培养第46-47页
            2.6.1 干细胞的传代第46页
            2.6.2 干细胞的复苏第46-47页
        2.7 拟胚体的分化及培养第47-48页
        2.8 细胞全基因组的提取(采用takara基因组提取试剂盒)第48-49页
        2.9 透射电镜样品的制备第49-50页
        2.10 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)(检测基因转录水平的表达和线粒体拷贝数)第50-54页
            2.10.1 细胞RNA提取第50-51页
            2.10.2 RNA电泳第51-52页
            2.10.3 RNA逆转录合成cDNA第52页
            2.10.4 实时定量PCR(Real-Time PCR)第52-54页
        2.11 Western Boltting第54-59页
            2.11.1 蛋白样品的提取及处理第54-55页
            2.11.2 蛋白电泳第55-57页
            2.11.3 转膜第57页
            2.11.4 膜的封闭及抗体杂交第57-58页
            2.11.5 显色曝光第58-59页
            2.11.6 探针洗脱第59页
        2.12 ATP检测(Promega试剂盒)第59-61页
        2.13 ROS检测(Molecular Probe)第61-62页
第三章 实验结果与分析第62-75页
    1 线粒体DNA拷贝数分析第62-63页
    2 m.1555A>G突变对线粒体12S rRNA转录水平的影响第63-64页
    3 m.1555A>G突变对mtDNA编码的OXPHOS复合体蛋白亚基转录水平的影响第64-65页
    4 m.1555A>G突变对核基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基转录水平的影响第65-67页
    5 m.1555A>G突变对线粒体基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基表达的影响第67-69页
    6 m.1555A>G突变对核基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基表达的影响第69-70页
    7 m.1555 A>G突变对ATP合成的影响第70-72页
    8 m.1555 A>G突变对ROS产量的影响第72-73页
    9 m.1555 A>G突变对线粒体形态、结构和分布的影响第73-75页
第四章 讨论第75-80页
第五章 论文创新性第80-81页
第六章 存在的问题与展望第81-82页
参考文献 (References)第82-94页
作者简历第94页

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