| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略词 | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 1 基因编辑 | 第18-20页 |
| 2 利用ZFN对iPSCs进行基因编辑 | 第20-22页 |
| 3 利用TALEN对iPSCs进行基因编辑 | 第22-24页 |
| 4 利用CRISPR/Cas对iPSCs进行基因编辑 | 第24-26页 |
| 5 基于iPSCs的细胞治疗 | 第26-29页 |
| 6 总结 | 第29-30页 |
| 第二章 实验研究 | 第30-62页 |
| 1 实验材料 | 第30-39页 |
| 1.1 实验样品 | 第30页 |
| 1.2 试剂及主要仪器 | 第30-39页 |
| 1.2.1 实验试剂配制 | 第30-38页 |
| 1.2.2 试剂 | 第38页 |
| 1.2.3 试剂盒 | 第38页 |
| 1.2.4 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-62页 |
| 2.1 质粒的扩增与提取 | 第39-40页 |
| 2.2 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备 | 第40-42页 |
| 2.3 原代细胞的培养 | 第42-44页 |
| 2.3.1 原代细胞的采集 | 第42页 |
| 2.3.2 原代细胞的传代 | 第42-43页 |
| 2.3.3 原代细胞的冻存 | 第43页 |
| 2.3.4 原代细胞的复苏 | 第43页 |
| 2.3.5 原代细胞的收集 | 第43-44页 |
| 2.4 143B细胞的培养 | 第44页 |
| 2.5 干细胞的无饲养层培养 | 第44-46页 |
| 2.5.1 干细胞的传代 | 第44-45页 |
| 2.5.2 干细胞的冻存 | 第45页 |
| 2.5.3 干细胞的复苏 | 第45页 |
| 2.5.4 干细胞的收集 | 第45-46页 |
| 2.6 干细胞的饲养层培养 | 第46-47页 |
| 2.6.1 干细胞的传代 | 第46页 |
| 2.6.2 干细胞的复苏 | 第46-47页 |
| 2.7 拟胚体的分化及培养 | 第47-48页 |
| 2.8 细胞全基因组的提取(采用takara基因组提取试剂盒) | 第48-49页 |
| 2.9 透射电镜样品的制备 | 第49-50页 |
| 2.10 实时荧光定量PCR(Real-time PCR)(检测基因转录水平的表达和线粒体拷贝数) | 第50-54页 |
| 2.10.1 细胞RNA提取 | 第50-51页 |
| 2.10.2 RNA电泳 | 第51-52页 |
| 2.10.3 RNA逆转录合成cDNA | 第52页 |
| 2.10.4 实时定量PCR(Real-Time PCR) | 第52-54页 |
| 2.11 Western Boltting | 第54-59页 |
| 2.11.1 蛋白样品的提取及处理 | 第54-55页 |
| 2.11.2 蛋白电泳 | 第55-57页 |
| 2.11.3 转膜 | 第57页 |
| 2.11.4 膜的封闭及抗体杂交 | 第57-58页 |
| 2.11.5 显色曝光 | 第58-59页 |
| 2.11.6 探针洗脱 | 第59页 |
| 2.12 ATP检测(Promega试剂盒) | 第59-61页 |
| 2.13 ROS检测(Molecular Probe) | 第61-62页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第62-75页 |
| 1 线粒体DNA拷贝数分析 | 第62-63页 |
| 2 m.1555A>G突变对线粒体12S rRNA转录水平的影响 | 第63-64页 |
| 3 m.1555A>G突变对mtDNA编码的OXPHOS复合体蛋白亚基转录水平的影响 | 第64-65页 |
| 4 m.1555A>G突变对核基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基转录水平的影响 | 第65-67页 |
| 5 m.1555A>G突变对线粒体基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基表达的影响 | 第67-69页 |
| 6 m.1555A>G突变对核基因编码的OXPHOS复合体蛋白亚基表达的影响 | 第69-70页 |
| 7 m.1555 A>G突变对ATP合成的影响 | 第70-72页 |
| 8 m.1555 A>G突变对ROS产量的影响 | 第72-73页 |
| 9 m.1555 A>G突变对线粒体形态、结构和分布的影响 | 第73-75页 |
| 第四章 讨论 | 第75-80页 |
| 第五章 论文创新性 | 第80-81页 |
| 第六章 存在的问题与展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 (References) | 第82-94页 |
| 作者简历 | 第94页 |
