| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 氨基酸的缩写 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 酶的稳定性简介 | 第10-11页 |
| 1.2 影响酶热稳定性因素 | 第11-13页 |
| 1.3 酶稳定性改造方法 | 第13-17页 |
| 1.3.1 理性设计方法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 非理性设计方法—定向进化 | 第15-16页 |
| 1.3.3 半理性设计方法 | 第16-17页 |
| 1.4 卤醇脱卤酶HheC的研究现状和应用 | 第17-19页 |
| 1.5 本论文的研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 大引物易错PCR文库构建及筛选 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 实验材料和主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂配制方法 | 第21页 |
| 2.1.3 大引物易错PCR文库构建 | 第21-22页 |
| 2.1.4 大引物易错PCR文库热稳定性筛选 | 第22页 |
| 2.1.5 蛋白质纯化及浓度测定 | 第22-23页 |
| 2.1.6 良性突变体的热稳定性及最适温度测量 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第24-27页 |
| 2.2.1 大引物易错文库构建及热稳定性筛选 | 第24页 |
| 2.2.2 良性突变体的热稳定性和最适温度测定 | 第24-27页 |
| 2.2.3 良性突变体突变位点性质分析 | 第27页 |
| 2.3 本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 ISM文库构建及筛选 | 第28-43页 |
| 3.1 实验材料和方法 | 第28-32页 |
| 3.1.1 实验材料和主要仪器 | 第28页 |
| 3.1.2 迭代饱和突变文库的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.3 ISM文库的PCR方法 | 第29-30页 |
| 3.1.4 ISM文库的热稳定性筛选及突变体的热稳定性测定 | 第30-31页 |
| 3.1.5 ISM文库突变体的盐酸胍变性实验 | 第31页 |
| 3.1.6 ISM文库突变体的稳态动力学参数测定 | 第31页 |
| 3.1.7 ISM文库突变体的动力学拆分实验 | 第31-32页 |
| 3.1.8 突变体的结构分析 | 第32页 |
| 3.1.9 突变体的凝胶过滤分析 | 第32页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第32-42页 |
| 3.2.1 ISM突变文库筛选 | 第32页 |
| 3.2.2 迭代饱和突变体的热稳定性参数 | 第32-35页 |
| 3.2.3 迭代饱和突变文库中突变体的化学稳定性 | 第35-37页 |
| 3.2.4 良性突变体的稳态动力学参数和对映体选择性 | 第37-38页 |
| 3.2.5 良性突变体的三级结构分析 | 第38-40页 |
| 3.2.6 良性突变体的凝胶过滤分析 | 第40-42页 |
| 3.3 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 总结及展望 | 第43-46页 |
| 4.1 总结 | 第43页 |
| 4.2 展望 | 第43-46页 |
| 4.2.1 HheC活性、热稳定性和立体选择性的综合改造 | 第44-45页 |
| 4.2.2 HheC的耐有机溶剂改造 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 硕士期间取得的研究成果 | 第51-52页 |
