| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略语索引 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 质型多角体病毒概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 质型多角体病毒的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 质型多角体病毒的分类与命名 | 第12-13页 |
| 1.1.3 质型多角体病毒的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 质型多角体病毒的入侵机制 | 第14-15页 |
| 1.1.5 质型多角体病毒在害虫防治方面的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 马尾松毛虫质型多角体病毒概述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 DpCPV的基本特性 | 第16页 |
| 1.2.2 DpCPV基因结构及编码蛋白的特性分析 | 第16-17页 |
| 1.2.3 结构蛋白P50的切割修饰现象 | 第17-18页 |
| 1.2.4 DpCPV国内外研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4 研究的内容及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 DpCPV s7、s8基因片段的原核表达和抗体制备 | 第21-42页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 病毒、菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第23页 |
| 2.1.5 引物信息 | 第23-24页 |
| 2.1.6 测序 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 病毒的增殖 | 第24页 |
| 2.2.2 多角体的纯化和病毒基因组dsRNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 DpCPV s7和s8 ORF全长的扩增 | 第25-28页 |
| 2.2.4 连接T载体 | 第28页 |
| 2.2.5 转化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.2.7 酶切及酶切产物的纯化 | 第30页 |
| 2.2.8 连接表达载体pET28a | 第30-31页 |
| 2.2.9 转化 | 第31页 |
| 2.2.10 重组质粒pET28a- s7和pET28a- s8提取 | 第31页 |
| 2.2.11 双酶切表达载体鉴定阳性克隆子 | 第31-32页 |
| 2.2.12 测序以及序列分析 | 第32页 |
| 2.2.13 蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE凝胶的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第33-34页 |
| 2.2.16 细胞的破碎 | 第34页 |
| 2.2.17 蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.18 多克隆抗体的制备 | 第35页 |
| 2.2.19 抗血清的Western blot检测 | 第35-36页 |
| 2.3 结果 | 第36-40页 |
| 2.3.1 马尾松毛虫质型多角体病毒基因组片段的提取与纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.2 DpCPV s7和s8全长的扩增 | 第37页 |
| 2.3.3 各目的片段与表达载体连接亚克隆得到重组质粒的酶切分析 | 第37-38页 |
| 2.3.4 测序结果与分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 P44和P50原核表达分析 | 第39页 |
| 2.3.6 多克隆抗体的Western blot检测 | 第39-40页 |
| 2.4 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 DpCPV s7和s8编码蛋白的真核表达与定位 | 第42-57页 |
| 3.1 材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 质粒、菌株和细胞系 | 第42页 |
| 3.1.2 试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 溶液 | 第42-43页 |
| 3.1.4 培养基 | 第43页 |
| 3.1.5 引物信息 | 第43页 |
| 3.2 方法 | 第43-50页 |
| 3.2.1 重组Bacmid病毒的构建 | 第43-49页 |
| 3.2.2 重组病毒转染昆虫细胞Sf9 | 第49-50页 |
| 3.2.3 Western blot检测 | 第50页 |
| 3.2.4 细胞定位 | 第50页 |
| 3.3 结果 | 第50-55页 |
| 3.3.1 重组病毒载体构建 | 第50-52页 |
| 3.3.2 P50和P44的真核表达的SDS-PAGE检测 | 第52-53页 |
| 3.3.3 P50和P44的真核表达的Western blot检测 | 第53-54页 |
| 3.3.4 结构蛋白P50的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 3.4 小结 | 第55-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论 | 第57-58页 |
| 4.1.1 DpCPV s7编码相对分子量为 50kDa的蛋白P50 | 第57页 |
| 4.1.2 DpCPV s8编码相对分子量为 44kDa的蛋白P44 | 第57页 |
| 4.1.3 P44蛋白未参与P50蛋白的切割修饰过程 | 第57页 |
| 4.1.4 P50蛋白定位于细胞质中 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-67页 |
| 附录A1仪器设备 | 第59-60页 |
| 附录A2试剂 | 第60-62页 |
| 附录B | 第62-63页 |
| 附录C | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72页 |
