| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 灵芝多糖的免疫调节作用及机制 | 第14-17页 |
| 1.1.1 激活巨噬细胞 | 第14-15页 |
| 1.1.2 激活NK细胞 | 第15页 |
| 1.1.3 激活树突状细胞 | 第15-16页 |
| 1.1.4 激活B淋巴细胞 | 第16-17页 |
| 1.1.5 激活T淋巴细胞 | 第17页 |
| 1.2 T细胞功能性亚群的分化及功能 | 第17-23页 |
| 1.2.1 Th1/Th2细胞的分化 | 第18-19页 |
| 1.2.2 Th17/Treg细胞的分化 | 第19-22页 |
| 1.2.3 Th1/Th2细胞与疾病之间的关系 | 第22-23页 |
| 1.2.4 Th17/Treg细胞与疾病之间的关系 | 第23页 |
| 1.3 高通量测序技术 | 第23-25页 |
| 1.3.1 高通量测序技术的发展与应用 | 第23-24页 |
| 1.3.2 RNA测序技术 | 第24页 |
| 1.3.3 RNA测序技术在国内外研究的现状 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的主要内容及其目的意义 | 第25-27页 |
| 1.4.1 主要内容 | 第25页 |
| 1.4.2 研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 第2章 黑灵芝多糖对T淋巴细胞的免疫调节活性的影响 | 第27-46页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第29页 |
| 2.3 试验方法 | 第29-34页 |
| 2.3.1 纯化T淋巴细胞 | 第29-30页 |
| 2.3.2 分离纯化CD4~+T淋巴细胞 | 第30页 |
| 2.3.3 CCK-8法检测细胞增殖 | 第30页 |
| 2.3.4 ELISA法检测细胞因子 | 第30页 |
| 2.3.5 体外诱导Th17细胞生成 | 第30页 |
| 2.3.6 流式细胞术检测黑灵芝多糖对体外诱导Th17细胞分化的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.7 体外诱导Treg细胞生成 | 第31页 |
| 2.3.8 流式细胞术检测黑灵芝多糖对体外诱导Treg细胞分化的影响 | 第31页 |
| 2.3.9 建立免疫低下小鼠模型 | 第31页 |
| 2.3.10 分离脾淋巴细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.11 流式细胞仪检测Th17(CD4~+IL-17A~+)细胞亚群 | 第32页 |
| 2.3.12 流式细胞仪检测Treg(CD4~+CD25~+)细胞亚群 | 第32页 |
| 2.3.13 ELISA法检测Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1水平 | 第32页 |
| 2.3.14 RT-qPCR法检测Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1mRNA | 第32-33页 |
| 2.3.15 RT-qPCR法检测Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3和Foxp3mRNA表达 | 第33-34页 |
| 2.3.16 Westernblot法检测Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3、p-STAT3和Foxp3蛋白表达水平 | 第34页 |
| 2.3.17 数据处理 | 第34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-42页 |
| 2.4.1 PSG-1对纯化T淋巴细胞增殖能力的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.2 PSG-1对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.3 PSG-1对体外诱导Th17和Treg细胞分化的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.4 PSG-1对脾脏组织细胞因子水平的影响 | 第37页 |
| 2.4.5 PSG-1对Th17/Treg细胞因子IL-17A、IL-6、IL-10、TGF-β1mRNA表达水平的影响 | 第37-38页 |
| 2.4.6 PSG-1对Th17/Treg转录因子STAT3、RORγt和Foxp3mRNA表达水平的影响 | 第38-39页 |
| 2.4.7 PSG-1对Th17/Treg转录因子RORγt、STAT3、p-STAT3和Foxp3蛋白表达水平的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.8 PSG-1对免疫抑制小鼠的Th17(CD4~+IL-17A~+)和Treg(CD4~+CD25~+)细胞亚群的影响 | 第40-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-45页 |
| 2.6 本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 用RNA测序技术筛选黑灵芝多糖刺激T淋巴细胞的差异表达基因 | 第46-72页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第47-48页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47页 |
| 3.2.2 实验仪器与设备 | 第47-48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 RNA提取 | 第48页 |
| 3.3.2 总RNA质量和完整性检测 | 第48页 |
| 3.3.3 文库的准备及测序 | 第48-49页 |
| 3.3.4 RT-qPCR | 第49-50页 |
| 3.4 数据处理 | 第50-53页 |
| 3.4.1 原始数据的整理、过滤及质量评估 | 第51-52页 |
| 3.4.2 与参考序列对比 | 第52页 |
| 3.4.3 对比结果质控分析 | 第52页 |
| 3.4.4 基因表达量统计 | 第52-53页 |
| 3.4.5 表达量的测序质量评估 | 第53页 |
| 3.4.6 Gene Ontology富集分析 | 第53页 |
| 3.4.7 KEGG富集分析 | 第53页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第53-70页 |
| 3.5.1 样本总RNA质量评估 | 第53-55页 |
| 3.5.2 原始数据整理、过滤及质量评估 | 第55-56页 |
| 3.5.3 测序数据质控分析 | 第56-58页 |
| 3.5.4 比对分析 | 第58-62页 |
| 3.5.5 比对结果质控分析 | 第62-64页 |
| 3.5.6 表达量的测序质量评估 | 第64-67页 |
| 3.5.7 差异基因的筛选 | 第67页 |
| 3.5.8 GeneOntology富集分析 | 第67-68页 |
| 3.5.9 KEGG富集分析 | 第68-69页 |
| 3.5.10 RT-qPCR验证RNA测序结果的可靠性 | 第69-70页 |
| 3.6 讨论 | 第70-71页 |
| 3.7 本章小结 | 第71-72页 |
| 第4章 基于RNA测序技术研究黑灵芝多糖对T淋巴细胞免疫调节活性作用机制 | 第72-84页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第73页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第73页 |
| 4.2.2 主要仪器设备 | 第73页 |
| 4.3 试验方法 | 第73-75页 |
| 4.3.1 CCK-8法检测细胞增殖 | 第73-74页 |
| 4.3.2 ELISA法检测细胞因子 | 第74页 |
| 4.3.3 细胞内Ca~(2+)浓度测定 | 第74页 |
| 4.3.4 钙调磷酸酶(CaN)含量的测定 | 第74页 |
| 4.3.5 Westernblot检测蛋白 | 第74页 |
| 4.3.6 数据处理 | 第74-75页 |
| 4.4 结果与分析 | 第75-81页 |
| 4.4.1 PSG-1对Ca~(2+)/CaN的影响 | 第75-77页 |
| 4.4.2 钙离子通路抑制剂对T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响 | 第77-78页 |
| 4.4.3 PSG-1对促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响 | 第78-80页 |
| 4.4.4 MAPK三个亚基的抑制剂对T淋巴细胞增殖及细胞因子的影响 | 第80-81页 |
| 4.5 讨论 | 第81-83页 |
| 4.6 本章小结 | 第83-84页 |
| 第5章 结论与展望 | 第84-86页 |
| 5.1 本研究主要结论 | 第84-85页 |
| 5.2 本研究的主要创新点 | 第85页 |
| 5.3 进一步的研究方向 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-99页 |
| 附录 | 第99-119页 |
| 附录A | 第99-103页 |
| 附录B | 第103-119页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第119页 |
