| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 BAMBI 概述 | 第14-20页 |
| 1.1 BAMBI 的发现 | 第14页 |
| 1.2 BAMBI 的结构 | 第14页 |
| 1.3 BAMBI 与疾病 | 第14-15页 |
| 1.4 BAMBI 与组织发育 | 第15-16页 |
| 1.5 BAMBI 的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.6 BAMBI 对脂肪细胞分化作用的初步研究 | 第17-20页 |
| 第二章 Wnt/β‐catenin 信号通路与脂肪细胞分化 | 第20-25页 |
| 2.1 Wnt/β‐catenin 信号通路简介 | 第20-23页 |
| 2.1.1 Wnts | 第20-21页 |
| 2.1.2 Frizzled | 第21页 |
| 2.1.3 LRP5/6 | 第21页 |
| 2.1.4 Dishevelled | 第21页 |
| 2.1.5 β‐catenin | 第21-22页 |
| 2.1.6 GSK‐3 | 第22页 |
| 2.1.7 Axin | 第22页 |
| 2.1.8 APC | 第22-23页 |
| 2.1.9 TCF/LEF | 第23页 |
| 2.2 Wnt/β‐catenin 信号通路的作用机制 | 第23-24页 |
| 2.3 Wnt/β‐catenin 信号通路与脂肪形成 | 第24-25页 |
| 前言 | 第25-26页 |
| 第三章 猪 BAMBI 基因的组织及时序表达模式 | 第26-33页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 3.2.1 猪组织样采集 | 第26页 |
| 3.2.2 猪前体脂肪细胞分离培养及诱导分化 | 第26-27页 |
| 3.2.3 RNA 提取 | 第27页 |
| 3.2.4 RNA 的反转录 | 第27页 |
| 3.2.5 real‐time qPCR 检测 BAMBI mRNA 表达 | 第27-28页 |
| 3.2.6 细胞总蛋白提取 | 第28页 |
| 3.2.7 Western blotting | 第28页 |
| 3.3 数据分析 | 第28页 |
| 3.4 结果与分析 | 第28-30页 |
| 3.4.1 3 日龄与 180 日龄大白猪中 BAMBI 的组织表达谱 | 第28页 |
| 3.4.2 BAMBI 在体内及体外条件下猪前体脂肪细胞分化过程中的表达模式 | 第28-30页 |
| 3.4.3 BAMBI 在猪前体脂肪细胞分化过程的表达情况 | 第30页 |
| 3.5 讨论 | 第30-33页 |
| 第四章 干扰 BAMBI 促进猪前体脂肪细胞分化 | 第33-42页 |
| 4.1 材料 | 第33页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第33页 |
| 4.2 方法 | 第33-35页 |
| 4.2.1 猪 pLentiH1‐BAMBI shRNA 的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.2 慢病毒的包装 | 第34页 |
| 4.2.3 慢病毒滴度的测定 | 第34页 |
| 4.2.4 慢病毒侵染猪前体脂肪细胞 | 第34页 |
| 4.2.5 猪前体脂肪细胞分离培养及诱导分化 | 第34页 |
| 4.2.6 油红 O 染色及提取 | 第34页 |
| 4.2.7 细胞总 RNA 及蛋白提取 | 第34-35页 |
| 4.2.8 Real‐time qPCR | 第35页 |
| 4.2.9 Western blotting | 第35页 |
| 4.3 数据分析 | 第35页 |
| 4.4 结果分析 | 第35-39页 |
| 4.4.1 BAMBI 慢病毒干扰载体的构建 | 第35-36页 |
| 4.4.2 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒的包装与侵染猪前体脂肪细胞 | 第36-37页 |
| 4.4.3 pLentiH1‐BAMBI shRNA1/2/3 慢病毒干扰效率检测 | 第37页 |
| 4.4.4 干扰 BAMBI 后促进猪前体脂肪细胞分化 | 第37-39页 |
| 4.5 讨论 | 第39-42页 |
| 第五章 超表达 BAMBI 抑制猪前体脂肪细胞分化 | 第42-50页 |
| 5.1 材料 | 第42页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 5.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 5.2.1 Ad‐BAMBI 超表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.2.2 Ad‐BAMBI 超表达载体的包装、扩繁 | 第43页 |
| 5.2.3 腺病毒滴度测定 | 第43页 |
| 5.2.4 腺病毒侵染猪前体脂肪细胞 | 第43页 |
| 5.2.5 猪前体脂肪细胞分离培养基诱导分化 | 第43页 |
| 5.2.6 油红 O 染色及提取 | 第43页 |
| 5.2.7 细胞总 RNA 及蛋白提取 | 第43页 |
| 5.2.8 Real‐time qPCR | 第43-44页 |
| 5.2.9 Western blotting | 第44页 |
| 5.3 数据分析 | 第44页 |
| 5.4 结果分析 | 第44-47页 |
| 5.4.1 BAMBI 重组腺病毒的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| 5.4.2 BAMBI 重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定 | 第45页 |
| 5.4.3 Ad‐BAMBI 侵染猪前体脂肪细胞及超表达效率检测 | 第45-47页 |
| 5.4.4 超表达 BAMBI 抑制猪前体脂肪细胞分化 | 第47页 |
| 5.5 讨论 | 第47-50页 |
| 第六章 BAMBI 与 Wnt/β‐catenin 信号通路在成脂过程的作用机制 | 第50-57页 |
| 6.1 材料 | 第50页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 6.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 6.2.1 慢病毒侵染猪前体脂肪细胞 | 第50-51页 |
| 6.2.2 腺病毒侵染猪前体脂肪细胞 | 第51页 |
| 6.2.3 油红 O 染色及提取 | 第51页 |
| 6.2.4 细胞总 RNA 及蛋白提取 | 第51页 |
| 6.2.5 细胞核蛋白提取 | 第51页 |
| 6.2.6 Real‐time qPCR | 第51页 |
| 6.2.7 Western blotting | 第51页 |
| 6.3 数据分析 | 第51页 |
| 6.4 结果分析 | 第51-55页 |
| 6.4.1 BAMBI 促进 Wnt/β‐catenin 信号通路抑制猪前体脂肪细胞分化 | 第51-52页 |
| 6.4.2 不同浓度 LiCl 对猪前体脂肪细胞分化的影响 | 第52-54页 |
| 6.4.3 超表达 BAMBI 促进 LiCl 对猪前体脂肪细胞分化的抑制作用 | 第54-55页 |
| 6.5 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57页 |
| 创新点 | 第57页 |
| 需进一步研究的问题 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
