| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 图表索引 | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 1 诺卡菌多重 PCR 检测方法的建立 | 第16-26页 |
| 1.1 材料与方法 | 第16-20页 |
| 1.1.1 菌株来源 | 第16页 |
| 1.1.2 模板制备 | 第16-18页 |
| 1.1.3 引物的设计与合成 | 第18页 |
| 1.1.4 单重 PCR 及产物序列分析 | 第18-19页 |
| 1.1.5 多重 PCR 条件的优化 | 第19页 |
| 1.1.6 敏感性和特异性试验 | 第19-20页 |
| 1.2 结果 | 第20-24页 |
| 1.2.1 单重 PCR 结果及序列分析 | 第20-21页 |
| 1.2.2 多重 PCR 检测 | 第21-23页 |
| 1.2.3 多重 PCR 方法特异性 | 第23-24页 |
| 1.2.4 多重 PCR 方法敏感性 | 第24页 |
| 1.3 讨论 | 第24-26页 |
| 2 诺卡菌 Real-Time PCR 检测方法的建立 | 第26-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-37页 |
| 2.1.1 主要仪器设备与试剂 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26-28页 |
| 2.1.3 引物与探针合成 | 第28页 |
| 2.1.4 质粒标准品的制备 | 第28-35页 |
| 2.1.4.1 提取鼻疽诺卡菌标准菌株 DSM43003 的 DNA | 第28-29页 |
| 2.1.4.2 扩增 rpoB 基因 | 第29-30页 |
| 2.1.4.3 纯化 PCR 产物 | 第30-31页 |
| 2.1.4.4 连接 pMD-18T 载体 | 第31-32页 |
| 2.1.4.5 导入 JM109 感受态细胞 | 第32页 |
| 2.1.4.6 筛选阳性克隆子 | 第32页 |
| 2.1.4.7 提取质粒 | 第32-34页 |
| 2.1.4.8 质粒测序验证 | 第34-35页 |
| 2.1.5 质粒拷贝数浓度换算 | 第35页 |
| 2.1.6 标准曲线的建立 | 第35页 |
| 2.1.7 TaqMan 探针荧光定量 PCR 反应体系及反应条件 | 第35页 |
| 2.1.8 引物探针的特异性检测 | 第35-36页 |
| 2.1.9 痰液模拟标本的制备及核酸提取 | 第36-37页 |
| 2.2 结果 | 第37-43页 |
| 2.2.1 标准曲线的建立 | 第37-40页 |
| 2.2.2 引物与探针特异性检测 | 第40-42页 |
| 2.2.3 痰液模拟标本检测 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 综述 | 第49-61页 |
| 综述参考文献 | 第58-61页 |
| 个人简历及发表论文参与课题 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
