| 提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 中英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 病毒样颗粒疫苗及其研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1.1 病毒样颗粒及其分类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 病毒样颗粒的免疫原性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 病毒样颗粒抗原的表达 | 第15-18页 |
| 1.1.4 病毒样颗粒的纯化和组装 | 第18-19页 |
| 1.1.5 病毒样颗粒的鉴定 | 第19页 |
| 1.1.6 病毒样颗粒疫苗的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2 猪圆环病毒及其疫苗的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.2.1 猪圆环病毒的特性 | 第22-25页 |
| 1.2.2 猪圆环病毒相关疾病 | 第25-26页 |
| 1.2.3 猪圆环病毒疫苗研究进展 | 第26-29页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 第2章 材料与方法 | 第31-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 2.1.1 试剂和材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第32页 |
| 2.1.3 培养基 | 第32页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.5 主要实验设备 | 第32-33页 |
| 2.2 引物设计与合成 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-45页 |
| 2.3.1 PCV2b-CP 编码基因的合成及重组质粒的构建 | 第34-37页 |
| 2.3.2 重组质粒 pET28a-CP-His 的构建 | 第37页 |
| 2.3.3 CP-His 在大肠杆菌中的表达与鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.4 重组蛋白 CP-His 的纯化方法摸索 | 第39-41页 |
| 2.3.5 纯化后蛋白 CP-His 的鉴定检测 | 第41-42页 |
| 2.3.6 病毒样颗粒的组装及鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3.7 PCV2b 病毒样颗粒的活性检测 | 第43-45页 |
| 第3章 实验结果 | 第45-67页 |
| 3.1 PCV2b CP 编码基因的获取 | 第45-49页 |
| 3.1.1 PCV2b CP 编码基因的书写 | 第45页 |
| 3.1.2 PCR 搭建方法获取 A、B 基因片段 | 第45-46页 |
| 3.1.3 A、B 基因片段的 T-A 克隆 | 第46-47页 |
| 3.1.4 重组质粒 pET28a-CP 的构建 | 第47-49页 |
| 3.2 PCV2b CP-His 编码基因的获取及基因克隆 | 第49-51页 |
| 3.2.1 PCV2b CP-His 编码基因的获取 | 第49-50页 |
| 3.2.2 PCV2b CP-His 编码基因的 T-A 克隆 | 第50页 |
| 3.2.3 pET28a-CP-His 重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3.3 重组蛋白 CP-His 在大肠杆菌内表达及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4 CP-His 蛋白纯化条件的摸索 | 第52-58页 |
| 3.4.1 分子筛层析法纯化 | 第53-54页 |
| 3.4.2 硫酸铵沉淀法纯化 | 第54-55页 |
| 3.4.3 镍亲和层析法纯化 | 第55-58页 |
| 3.5 Western blot 检测纯化后 CP-His | 第58-59页 |
| 3.6 不同条件下 VLP 的组装及检测 | 第59-63页 |
| 3.6.1 CP-His 的组装和透射电镜方法检测 VLP | 第59-61页 |
| 3.6.2 荧光质谱分析法检测 VLPs | 第61-63页 |
| 3.7 PCV2b VLPs 疫苗的活性检测 | 第63-67页 |
| 3.7.1 PCV2b VLPs 的抗原性检测 | 第64页 |
| 3.7.2 PCV2b VLPs 诱导小鼠产生 PCV2b 特异性抗体的效力 | 第64-67页 |
| 第4章 讨论 | 第67-73页 |
| 4.1 CP-His 编码基因的输写 | 第67-68页 |
| 4.2 CP-His 纯化的影响因素 | 第68-70页 |
| 4.3 CP-His 组装的影响因素 | 第70-71页 |
| 4.4 FSA 检测 VLP 组装与去组装的可行性 | 第71-72页 |
| 4.5 VLPs 的活性检测 | 第72-73页 |
| 第5章 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-89页 |
| 作者简介及科研成果 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
