| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 海洋真菌 | 第12-14页 |
| 1.1.1 曲霉属的特性 | 第12-13页 |
| 1.1.2 海洋灰绿曲霉HB1-19 | 第13-14页 |
| 1.2 丝状真菌发育模式 | 第14-18页 |
| 1.2.1 无性发育 | 第14-16页 |
| 1.2.2 有性发育 | 第16-18页 |
| 1.3 Seb1转录因子 | 第18-21页 |
| 1.3.1 Seb1对环境压力的响应 | 第18-20页 |
| 1.3.2 Seb1对发育及次级代谢产物的影响 | 第20-21页 |
| 1.4 构巢曲霉alcR-alcA系统 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题研究内容及意义 | 第22-23页 |
| 第2章 海洋灰绿曲霉Agseb1基因的克隆与分析 | 第23-31页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 培养基及培养条件 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 灰绿曲霉基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.3.2 简并PCR设计及条件 | 第24-25页 |
| 2.3.3 Hi-Tail PCR引物设计及反应条件 | 第25-26页 |
| 2.3.4 灰绿曲霉RNA的提取及逆转录 | 第26页 |
| 2.4 实验结果 | 第26-29页 |
| 2.4.1 Agseb1基因全长及两端侧翼序列 | 第26页 |
| 2.4.2 蛋白序列分析 | 第26-29页 |
| 2.4.3 进化树的构建 | 第29页 |
| 2.5 小结 | 第29-31页 |
| 第3章 △Agseb1菌株的构建 | 第31-39页 |
| 3.1 前言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31页 |
| 3.2.1 实验试剂及菌株 | 第31页 |
| 3.2.2 培养基 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-35页 |
| 3.3.1 敲除质粒pUCHK的构建策略 | 第31-33页 |
| 3.3.2 原生质体制备及电转 | 第33-35页 |
| 3.4 实验结果 | 第35-38页 |
| 3.4.1 质粒pUCHK的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.2 △Agseb1菌株的筛选 | 第36-38页 |
| 3.5 小结 | 第38-39页 |
| 第4章 △Agseb1菌株的表型与灰绿霉素A产量分析 | 第39-51页 |
| 4.1 前言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料 | 第39页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第39页 |
| 4.2.2 培养基 | 第39页 |
| 4.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.3.1 菌落表型观察 | 第39页 |
| 4.3.2 菌丝形态观察 | 第39-40页 |
| 4.3.3 分生孢子计数 | 第40页 |
| 4.3.4 环境压力敏感性检测 | 第40页 |
| 4.3.5 5L罐发酵方法 | 第40页 |
| 4.3.6 灰绿霉素A测定 | 第40-41页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第41-49页 |
| 4.4.1 △Agseb1与WT的形态观察 | 第41-45页 |
| 4.4.2 缺失株对环境压力敏感性检测 | 第45-46页 |
| 4.4.3 灰绿霉素A合成检测 | 第46-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-51页 |
| 第5章 △Agseb1菌株的无性发育基因转录分析 | 第51-57页 |
| 5.1 前言 | 第51页 |
| 5.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第51页 |
| 5.2.2 培养基 | 第51-52页 |
| 5.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.3.1 不同盐度条件下的菌株培养 | 第52页 |
| 5.3.2 荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 5.4 实验结果 | 第53-56页 |
| 5.4.1 不同盐度梯度下野生型与缺失株表型 | 第53-54页 |
| 5.4.2 不同盐浓度下相关基因的转录分析 | 第54-56页 |
| 5.5 小结 | 第56-57页 |
| 第6章 alcR/aclA诱导型启动子的应用 | 第57-65页 |
| 6.1 前言 | 第57页 |
| 6.2 实验材料 | 第57-58页 |
| 6.2.1 实验试剂及菌株 | 第57页 |
| 6.2.2 培养基 | 第57-58页 |
| 6.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 6.3.1 随机插入质粒pMZ-REA的构建策略 | 第58-60页 |
| 6.3.2 诱导型质粒pMZHR的构建策略 | 第60-61页 |
| 6.3.3 原生质体转化及转化子验证 | 第61页 |
| 6.3.4 荧光观察 | 第61页 |
| 6.4 实验结果 | 第61-64页 |
| 6.4.1 质粒pMZ-REA及pMZHR的构建 | 第61-62页 |
| 6.4.2 alcA∷gfp及alcA∷Agseb1突变株的筛选 | 第62-64页 |
| 6.4.3 alcR/alcA表达系统的启动 | 第64页 |
| 6.5 小结 | 第64-65页 |
| 第7章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 7.1 主要结论 | 第65页 |
| 7.2 创新点 | 第65-66页 |
| 7.3 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
