| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一部分 pcDNA3.1-V5/His B-CRKL和p EGFP-N1-CRKL真核表达质粒构建 | 第16-37页 |
| 材料和方法 | 第16-26页 |
| 1. 材料 | 第16-18页 |
| 1.1 细胞株、菌种来源 | 第16页 |
| 1.2 引物、载体 | 第16页 |
| 1.3 主要实验仪器和试剂 | 第16-18页 |
| 1.4 溶液配制 | 第18页 |
| 2. 方法 | 第18-26页 |
| 2.1 细胞培养 | 第18页 |
| 2.2 RT-PCR法扩增CRKL目的基因 | 第18-21页 |
| 2.3 p EASY-CRKL克隆质粒的构建及鉴定 | 第21-24页 |
| 2.4 pc DNA3.1/V5-His B-CRKL和p EGFP-N1-CRKL真核表达质粒的构建及鉴定 | 第24-26页 |
| 结果 | 第26-31页 |
| 1. CRKL基因的扩增 | 第26页 |
| 2. p EASY-blunt simple-CRKL克隆质粒的酶切鉴定 | 第26-28页 |
| 3. p EASY-blunt simple-CRKL克隆质粒的测序鉴定 | 第28页 |
| 4. pc DNA3.1/V5-His B-CRKL和p EGFP-N1-CRKL真核表达质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 5. 真核表达质粒的测序鉴定结果 | 第29-31页 |
| 讨论 | 第31-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第二部分 CRKL-GFP融合蛋白定位及CRKL过表达对Hca-P细胞体外增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响 | 第37-56页 |
| 材料和方法 | 第37-43页 |
| 1. 材料 | 第37-39页 |
| 1.1 细胞株和真核表达载体 | 第37页 |
| 1.2 主要实验仪器和试剂 | 第37-39页 |
| 2. 方法 | 第39-43页 |
| 2.1 激光共聚焦定位CRKL-GFP融合蛋白 | 第39-40页 |
| 2.2 Western blot检测CRKL在Hca-P细胞中的瞬转表达水平 | 第40-41页 |
| 2.3 CCK-8 法检测CRKL过表达对Hca-P细胞增殖能力的影响 | 第41页 |
| 2.4 软琼脂克隆形成法检测CRKL过表达对Hca-P细胞增殖能力的影响 | 第41-42页 |
| 2.5 Transwell小室法检测CRKL过表达对Hca-P细胞迁移能力的影响 | 第42-43页 |
| 2.6 Transwell小室法检测CRKL过表达对Hca-P细胞侵袭能力的影响 | 第43页 |
| 2.7 统计学分析 | 第43页 |
| 结果 | 第43-51页 |
| 1. CRKL-GFP融合蛋白在Hca-P细胞中的表达定位 | 第43-44页 |
| 2. CRKL在Hca-P中的瞬转表达稳定上调 | 第44-45页 |
| 3. CRKL表达上调与Hca-P细胞增殖能力负相关 | 第45-46页 |
| 4. CRKL过表达抑制Hca-P细胞克隆形成能力 | 第46-48页 |
| 5. Hca-P细胞迁移能力与CRKL表达量呈负相关 | 第48-49页 |
| 6. CRKL过表达抑制Hca-P细胞的侵袭能力 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 综述 | 第56-68页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
