| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 L-色氨酸的基本概况 | 第12-13页 |
| 1.2 L-色氨酸的生产方法 | 第13-14页 |
| 1.3 L-色氨酸的测定方法 | 第14-15页 |
| 1.3.1 对二甲氨基苯甲醛分光光度法 | 第15页 |
| 1.3.2 三波长分光光度法 | 第15页 |
| 1.3.3 氨基酸分析仪测定法 | 第15页 |
| 1.3.4 HPLC法 | 第15页 |
| 1.4 L-色氨酸的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.5 L-色氨酸生物合成途径 | 第16-18页 |
| 1.6 L-色氨酸菌株的构建策略 | 第18-20页 |
| 1.6.1 代谢控制育种策略 | 第18-19页 |
| 1.6.2 转运工程育种策略 | 第19-20页 |
| 1.7 细菌基因敲除的方法 | 第20-22页 |
| 1.7.1 Red重组技术的原理 | 第20页 |
| 1.7.2 介导Red基因敲除的一般程序 | 第20-22页 |
| 1.7.3 Red重组系统技术难点 | 第22页 |
| 1.8 论文的研究意义和主要内容 | 第22-24页 |
| 第二章 L-色氨酸工程菌株的改造 | 第24-44页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料和方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.2 仪器和试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第26-27页 |
| 2.2.4 部分试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.5 引物 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 trpR基因敲除流程 | 第28-33页 |
| 2.3.1.1 trpR基因敲除组件的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.1.2 编码重组酶的pKD46质粒转入感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.3.1.3 重组酶的诱导表达及Kan抗性基因转入细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.1.4 电转pCP20质粒进行抗性消除 | 第32页 |
| 2.3.1.5 抗性消除质粒的丢失及阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.2 tnaB基因敲除菌的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 trpR/tnaB双基因敲除菌的构建 | 第34页 |
| 2.3.4 大肠杆菌突变菌摇瓶发酵筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.4.1 L-Trp测定方法 | 第34-35页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第35-42页 |
| 2.4.1 trpR、tnaB单基因敲除菌的构建 | 第35-38页 |
| 2.4.2 trpR/tnaB双基因敲除菌的构建 | 第38-40页 |
| 2.4.3 trpR,tnaB和trpR/tnaB基因敲除菌的摇瓶发酵结果 | 第40-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 EC-3产L-色氨酸的培养基优化 | 第44-62页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料和方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 材料 | 第44-46页 |
| 3.2.1.1 供试菌株 | 第44页 |
| 3.2.1.2 实验仪器和设备 | 第44-45页 |
| 3.2.1.3 实验试剂 | 第45页 |
| 3.2.1.4 相关溶液配制 | 第45-46页 |
| 3.2.1.5 培养基 | 第46页 |
| 3.2.2 方法 | 第46-47页 |
| 3.2.2.1 培养方法 | 第46-47页 |
| 3.2.2.2 分析测定方法 | 第47页 |
| 3.3 利用摇瓶发酵进行培养及优化 | 第47-49页 |
| 3.3.1 培养基成分的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.1.1 几种常用碳源对大肠杆菌EC-3菌体产L-色氨酸的影响 | 第47页 |
| 3.3.1.2 氮源对大肠杆菌EC-3菌体生长和产L-色氨酸的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.1.3 无机盐的均匀设计 | 第48页 |
| 3.3.2 培养条件的优化 | 第48-49页 |
| 3.3.2.1 初始pH对大肠杆菌EC-3产L-色氨酸的影响 | 第49页 |
| 3.3.2.2 温度对大肠杆菌EC-3产L-色氨酸的影响 | 第49页 |
| 3.3.2.3 接种量对大肠杆菌EC-3产L-色氨酸的影响 | 第49页 |
| 3.4 50L发酵罐的放大培养 | 第49页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第49-60页 |
| 3.5.1 最优碳源的选择 | 第49-51页 |
| 3.5.1.1 最适碳源的确定 | 第49-50页 |
| 3.5.1.2 最适碳源浓度的确定 | 第50-51页 |
| 3.5.2 最优氮源的选择 | 第51-54页 |
| 3.5.2.1 最适氮源的确定 | 第51-53页 |
| 3.5.2.2 最适氮源浓度的确定 | 第53-54页 |
| 3.5.3 无机盐的均匀设计实验 | 第54-56页 |
| 3.5.4 最适初始pH的确定 | 第56-57页 |
| 3.5.5 最适温度的确定 | 第57-58页 |
| 3.5.6 最适接种量的确定 | 第58-59页 |
| 3.5.7 50L发酵罐发酵生产L-色氨酸 | 第59-60页 |
| 3.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 总结 | 第62-66页 |
| 4.1 结论 | 第62-63页 |
| 4.1.1 高产L-色氨酸菌株的构建 | 第62-63页 |
| 4.1.2 大肠杆菌发酵培养基的研究 | 第63页 |
| 4.2 展望 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 个人简历 | 第76-78页 |
