| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-35页 |
| 1.1 生物固氮的类型 | 第11页 |
| 1.2 豆科植物-根瘤菌共生固氮 | 第11-14页 |
| 1.3 豆科植物中参与共生固氮的基因 | 第14页 |
| 1.4 转脂蛋白(lipid transfer protein) | 第14-22页 |
| 1.4.1 结构及理化性质 | 第15-17页 |
| 1.4.2 基因定位与表达模式 | 第17-19页 |
| 1.4.3 生物学功能 | 第19-22页 |
| 1.5 重金属镉胁迫对豆科植物的影响 | 第22-26页 |
| 1.5.1 镉对豆科植物生长的影响 | 第22-23页 |
| 1.5.2 镉对豆科植物根系的影响 | 第23页 |
| 1.5.3 镉对根瘤菌—豆科植物共生固氮体系的影响 | 第23-26页 |
| 1.6 植物共生固氮基因的有关研究策略和技术 | 第26-33页 |
| 1.6.1 差异表达基因的分离 | 第26-27页 |
| 1.6.2 RNAi技术 | 第27-28页 |
| 1.6.3 启动子克隆 | 第28-29页 |
| 1.6.4 基因表达定位 | 第29-32页 |
| 1.6.4.1 原位杂交组织定位 | 第29-31页 |
| 1.6.4.2 亚细胞定位 | 第31-32页 |
| 1.6.5 荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 1.7 紫云英共生固氮基因研究进展 | 第33-34页 |
| 1.8 研究目的及意义 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-51页 |
| 2.1 材料 | 第35-39页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第35页 |
| 2.1.2 微生物材料 | 第35页 |
| 2.1.3 营养液与培养基 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要分子试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 常用贮存液和缓冲液 | 第36-38页 |
| 2.1.6 主要耗材 | 第38页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.1.8 引物合成与测序 | 第38-39页 |
| 2.2 盆栽实验 | 第39-40页 |
| 2.2.1 紫云英与7653R互作盆栽 | 第39页 |
| 2.2.2 紫云英与菌根真菌互作盆栽 | 第39页 |
| 2.2.3 镉胁迫下紫云英盆栽 | 第39-40页 |
| 2.3 AsE246-cRNA探针的制备 | 第40-44页 |
| 2.3.1 目的cDNA的获得 | 第40-41页 |
| 2.3.2 TA克隆与测序 | 第41-42页 |
| 2.3.3 cRNA探针模板的制备 | 第42-43页 |
| 2.3.4 cRNA探针的体外转录 | 第43-44页 |
| 2.4 原位杂交 | 第44-46页 |
| 2.4.1 根瘤石蜡切片的制作 | 第44-45页 |
| 2.4.2 原位杂交 | 第45-46页 |
| 2.5 总RNA的提取与纯化 | 第46-47页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.5.2 总RNA的纯化 | 第47页 |
| 2.6 RT-PCR检测目标基因在紫云英中表达特征 | 第47-49页 |
| 2.6.1 反转录合成第一链cDNA | 第47-48页 |
| 2.6.2 RT-PCR验证cDNA合成 | 第48页 |
| 2.6.3 RT-PCR检测目标基因在各样品中的表达 | 第48-49页 |
| 2.7 荧光定量PCR分析目标基因的时空表达特征 | 第49-50页 |
| 2.7.1 标准曲线制作 | 第49页 |
| 2.7.2 荧光定量分析 | 第49-50页 |
| 2.7.2.1 目标基因在各待测样品中的表达特征测定 | 第49-50页 |
| 2.7.2.2 荧光定量结果分析 | 第50页 |
| 2.8 镉胁迫条件下紫云英共生固氮效应检测 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-71页 |
| 3.1 盆栽实验 | 第51-53页 |
| 3.1.1 紫云英与根瘤菌互作盆栽 | 第51页 |
| 3.1.2 紫云英与菌根真菌互作盆栽 | 第51-52页 |
| 3.1.3 镉胁迫下的紫云英盆栽 | 第52-53页 |
| 3.2 转脂蛋白基因AsE246在紫云英根瘤中的组织定位 | 第53-56页 |
| 3.2.1 cDNA片段的获得 | 第53页 |
| 3.2.2 重组质粒的制备 | 第53-54页 |
| 3.2.3 线性化模板 | 第54页 |
| 3.2.4 体外转录地高辛标记cRNA | 第54-55页 |
| 3.2.5 原位杂交结果 | 第55-56页 |
| 3.3 目标基因在紫云英-根瘤菌共生体系中的组织表达特征 | 第56-58页 |
| 3.3.1 cDNA的合成 | 第56-57页 |
| 3.3.2 目标基因在共生体各器官组织中的表达特征 | 第57-58页 |
| 3.4 目标基因在紫云英-菌根真菌共生体系中的组织表达特征 | 第58-59页 |
| 3.4.1 cDNA的合成 | 第58页 |
| 3.4.2 目标基因在菌根共生体中的组织表达特征 | 第58-59页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR | 第59-63页 |
| 3.5.1 PCR引物验证 | 第59-60页 |
| 3.5.2 准曲线制作 | 第60-61页 |
| 3.5.3 荧光定量PCR | 第61-63页 |
| 3.6 目标基因在紫云英-根瘤菌共生体中系中的时空表达特征 | 第63-66页 |
| 3.6.1 目标基因在器官组织中的表达特性 | 第63-64页 |
| 3.6.2 目标基因在根瘤发育和固氮过程中的表达动态 | 第64-66页 |
| 3.7 镉胁迫条件下目标基因的表达特征 | 第66-69页 |
| 3.8 镉胁迫条件下的共生固氮表型 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81页 |
