| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写词表 | 第10-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 胸腺素α1 研究和应用 | 第12-18页 |
| 1.2.1 胸腺素α1 发现 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Tα1 生物学功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 Tα1 临床应用 | 第14-16页 |
| 1.2.3.1 Tα1 治疗肝炎 | 第14-15页 |
| 1.2.3.2 Tα1 治疗肿瘤 | 第15页 |
| 1.2.3.3 Tα1 治疗免疫缺陷性疾病 | 第15-16页 |
| 1.2.4 临床Tα1 来源 | 第16-18页 |
| 1.2.4.1 组织提取法 | 第16页 |
| 1.2.4.2 化学合成法 | 第16-17页 |
| 1.2.4.3 基因工程法 | 第17-18页 |
| 1.3 植物生物反应器 | 第18-20页 |
| 1.3.1 植物生物反应器研究进展 | 第18页 |
| 1.3.2 植物生物反应器优点 | 第18-19页 |
| 1.3.3 植物生物反应器发展前景 | 第19-20页 |
| 1.4 植物转基因安全 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-46页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 酶与试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.5 寡核苷酸引物 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-46页 |
| 2.2.1 Tα1 基因设计和4 连体Tα1（4×Tα1）构建 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 Tα1 基因合成 | 第24页 |
| 2.2.1.2 4×Tα1 构建 | 第24-25页 |
| 2.2.2 植物表达载体构建 | 第25-29页 |
| 2.2.2.1 质粒提取和酶切 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 酶切产物回收和连接 | 第26-28页 |
| 2.2.2.3 连接产物转化大肠杆菌 | 第28页 |
| 2.2.2.4 PCR 及测序检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3 工程菌制备 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 根癌农杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| 2.2.3.2 根癌农杆菌转化 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 PCR 检测 | 第30页 |
| 2.2.4 烟草叶盘遗传转化 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 烟草无菌苗培养 | 第30页 |
| 2.2.4.2 叶盘法转化烟草 | 第30-31页 |
| 2.2.5 转基因烟草PCR 检测 | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 SDS 法微量抽提烟草基因组DNA | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 转基因烟草PCR 检测 | 第32页 |
| 2.2.6 转基因烟草的Southern Blot 分析 | 第32-38页 |
| 2.2.6.1 CTAB 法抽提烟草基因组DNA | 第32-34页 |
| 2.2.6.2 酶切 | 第34页 |
| 2.2.6.3 转膜及固定 | 第34-36页 |
| 2.2.6.4 探针制备与标记 | 第36-37页 |
| 2.2.6.5 杂交 | 第37页 |
| 2.2.6.6 洗膜 | 第37页 |
| 2.2.6.7 检测和自显影 | 第37-38页 |
| 2.2.7 转Tα1 烟草T1 代遗传分析 | 第38页 |
| 2.2.8 转基因烟草可溶性蛋白提取和测定 | 第38-39页 |
| 2.2.8.1 转基因烟草可溶性蛋白提取 | 第38页 |
| 2.2.8.2 Bradford 法测定可溶性蛋白浓度 | 第38-39页 |
| 2.2.9 转基因烟草ELISA 检测（目标蛋白含量测定） | 第39-41页 |
| 2.2.9.1 标准曲线的制作（按以下操作步骤进行） | 第39-40页 |
| 2.2.9.2 转Tα1 烟草植物目标蛋白含量ELISA 检测 | 第40-41页 |
| 2.2.10 转基因烟草Western Blot 分析 | 第41-43页 |
| 2.2.10.1 植物可溶蛋白SDS-PAGE 检测 | 第41-42页 |
| 2.2.10.2 转膜 | 第42-43页 |
| 2.2.10.3 膜杂交 | 第43页 |
| 2.2.11 转基因烟草表达Tα1 生物活性测定（MTT 法） | 第43-46页 |
| 2.2.11.1 脾细胞悬液制备 | 第43-44页 |
| 2.2.11.2 反应体系及实验流程 | 第44-45页 |
| 2.2.11.3 数据处理 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-67页 |
| 3.1 植物表达载体构建 | 第46-52页 |
| 3.1.1 Tα1 合成和DNA 测序 | 第46-47页 |
| 3.1.2 4 连体Tα1（4×Tα1）构建 | 第47-49页 |
| 3.1.3 载体 p35s::4×Tα1(twin T-DNAs)构建 | 第49-51页 |
| 3.1.4 工程农杆菌EHA105 制备 | 第51-52页 |
| 3.2 烟草遗传转化和再生 | 第52-54页 |
| 3.3 转基因烟草PCR 检测 | 第54-55页 |
| 3.4 转基因烟草Southern blot 分析 | 第55-56页 |
| 3.5 转Tα1 烟草分离世代遗传分析 | 第56-58页 |
| 3.6 转基因烟草可溶性蛋白提取和测定 | 第58-60页 |
| 3.7 转基因烟草可溶性蛋白SDS-PAGE | 第60-61页 |
| 3.8 转基因烟草总可溶蛋白的Western Blot 分析 | 第61-62页 |
| 3.9 转基因烟草的ELISA 检测 | 第62-65页 |
| 3.10 生物活性测定结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 4.1 烟草作为生物反应器的优缺点 | 第67页 |
| 4.2 提高烟草转化率 | 第67-68页 |
| 4.3 提高植物系统外源蛋白表达量 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69页 |
| 4.5 后续研究工作 | 第69-70页 |
| 附录 实验涉及的试剂和培养基配方 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-88页 |
