| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 NAC转录因子研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1 NAC转录因子的结构特点及其分类 | 第13-14页 |
| 1.2 NAC转录因子的生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.2.1 ATAF家族 | 第14-15页 |
| 1.2.2 NAM亚家族 | 第15-16页 |
| 1.2.3 其它NAC转录因子 | 第16-17页 |
| 2 活性氧的产生和抗氧化系统 | 第17-20页 |
| 2.1 植物体内活性氧的产生 | 第17-18页 |
| 2.1.1 叶绿体 | 第18页 |
| 2.1.2 线粒体 | 第18页 |
| 2.1.3 过氧化物酶体 | 第18页 |
| 2.1.4 其它细胞器 | 第18页 |
| 2.2 植物的抗氧化系统 | 第18-20页 |
| 3 大豆遗传转化进展 | 第20-27页 |
| 3.1 大豆遗传转化的再生体系 | 第21-22页 |
| 3.1.1 大豆体细胞胚胎发生再生系统 | 第21-22页 |
| 3.1.2 大豆器官发生再生系统 | 第22页 |
| 3.1.3 大豆原生质体再生系统 | 第22页 |
| 3.2 大豆遗传转化的方法和进展 | 第22-27页 |
| 3.2.1 农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第23-25页 |
| 3.2.2 基因枪法 | 第25页 |
| 3.2.3 花粉管通道法 | 第25页 |
| 3.2.4 电穿孔法 | 第25-26页 |
| 3.2.5 PEG法 | 第26-27页 |
| 研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 GmNAC2和GmNAC5的表达特性分析 | 第29-37页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 1.1 植物材料 | 第29页 |
| 1.2 植物材料的处理 | 第29页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR分析GmNAC2和GmNAC5的表达特性 | 第29-30页 |
| 1.3.1 大豆总DNA和RNA的提取 | 第29-30页 |
| 1.3.2 cDNA第一链的合成 | 第30页 |
| 1.3.3 qRT-PCR分析 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.1 GmNAC2的表达分析 | 第30-32页 |
| 2.1.1 GmNAC2的组织表达特性 | 第30-31页 |
| 2.1.2 GmNAC2在非生物逆境胁迫下的表达特性 | 第31-32页 |
| 2.2 GmNAC5的表达分析 | 第32-34页 |
| 2.2.1 GmNAC5的组织表达特性 | 第32-33页 |
| 2.2.2 GmNAC5在非生物逆境胁迫下的表达特性 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-37页 |
| 第三章 GmNAC2基因转化烟草和大豆毛状根及功能分析 | 第37-71页 |
| 1 材料与方法 | 第37-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第37页 |
| 1.2 宿主菌与质粒载体 | 第37页 |
| 1.3 表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 1.4 农杆菌叶盘浸染法转化烟草 | 第40-41页 |
| 1.4.1 受体材料准备 | 第40页 |
| 1.4.2 农杆菌的培养 | 第40页 |
| 1.4.3 农杆菌浸染叶盘 | 第40页 |
| 1.4.4 选择培养 | 第40页 |
| 1.4.5 继代选择培养 | 第40-41页 |
| 1.4.6 生根培养 | 第41页 |
| 1.5 发根农杆菌诱导大豆毛状根 | 第41-42页 |
| 1.5.1 受体材料准备 | 第41页 |
| 1.5.2 农杆菌的培养 | 第41页 |
| 1.5.3 农杆菌侵染 | 第41页 |
| 1.5.4 毛状根诱导 | 第41-42页 |
| 1.6 转基因植株阳性鉴定 | 第42页 |
| 1.6.1 转基因烟草的阳性鉴定 | 第42页 |
| 1.6.2 转基因毛状根的阳性鉴定 | 第42页 |
| 1.7 转基因植株的抗逆性分析 | 第42-46页 |
| 1.7.1 转基因烟草的逆境处理 | 第42-44页 |
| 1.7.2 转基因大豆毛状根的逆境处理 | 第44页 |
| 1.7.3 逆境处理后转基因植株生理生化反应 | 第44-46页 |
| 1.8 转基因烟草种子自由氨基酸含量测定 | 第46-47页 |
| 1.9 GmNAC2转基因烟草表达谱分析 | 第47-49页 |
| 1.9.1 植物材料的准备 | 第47页 |
| 1.9.2 芯片制备 | 第47-48页 |
| 1.9.3 检测与分析 | 第48页 |
| 1.9.4 生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-68页 |
| 2.1 Gateway方法构建GmNAC2植物表达载体 | 第49-50页 |
| 2.2 转基因烟草分子鉴定和逆境分析 | 第50-57页 |
| 2.2.1 转基因烟草分子鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.2 转基因烟草T_2代植株抗逆性鉴定 | 第51-53页 |
| 2.2.3 转基因烟草T_2代植株逆境条件下的MDA测定 | 第53-55页 |
| 2.2.4 转基因烟草T_2代植株逆境条件下的ROS分析 | 第55-57页 |
| 2.3 转基因烟草种子分析 | 第57-58页 |
| 2.4 转基因毛状根分子鉴定和逆境分析 | 第58-60页 |
| 2.4.1 转基因大豆毛状根分子鉴定 | 第58-59页 |
| 2.4.2 转基因大豆毛状根逆境条件下的抗氧化分析 | 第59-60页 |
| 2.5 GmNAC2过量表达后在烟草中的转录本分析 | 第60-68页 |
| 2.5.1 GmNAC2调控表达的差异基因的功能分类 | 第61-67页 |
| 2.5.2 qPCR对芯片结果的验证 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 GmNAC5基因转化烟草和大豆及功能分析 | 第71-85页 |
| 1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 1.1 实验材料 | 第71页 |
| 1.2 宿主菌与质粒载体 | 第71页 |
| 1.3 表达载体的构建 | 第71-72页 |
| 1.4 农杆菌叶盘浸染法转化烟草 | 第72页 |
| 1.5 农杆菌介导法转化大豆子叶节 | 第72-74页 |
| 1.5.1 大豆基因型的选择 | 第72页 |
| 1.5.2 农杆菌的培养 | 第72-73页 |
| 1.5.3 大豆种子的消毒 | 第73页 |
| 1.5.4 大豆种子萌发与外植体的获得 | 第73页 |
| 1.5.5 农杆菌浸染大豆子叶节外植体 | 第73-74页 |
| 1.5.6 丛生芽的诱导 | 第74页 |
| 1.5.7 丛生芽的伸长 | 第74页 |
| 1.5.8 生根和移栽及转化植株种子的收获 | 第74页 |
| 1.6 转基因植株阳性鉴定 | 第74-75页 |
| 1.6.1 转基因烟草的阳性鉴定 | 第74-75页 |
| 1.6.2 转基因大豆的阳性鉴定 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-82页 |
| 2.1 Gateway方法构建GmNAC5植物表达载体 | 第75-76页 |
| 2.2 转基因烟草的分子鉴定和表型观察 | 第76-79页 |
| 2.2.1 转基因烟草分子鉴定 | 第76-77页 |
| 2.2.2 转基因烟草表型观察 | 第77-79页 |
| 2.3 农杆菌介导GmNAC5基因转化大豆子叶节 | 第79-82页 |
| 2.3.1 转基因大豆的获得 | 第79页 |
| 2.3.2 转基因大豆分子鉴定 | 第79-81页 |
| 2.3.3 转基因大豆子表型观察 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-85页 |
| 全文结论 | 第85-87页 |
| 本研究创新之处 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录 | 第97-105页 |
| 攻读博士期间发表及待发表的论文 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
